DB31/T 531-2011 动物戊型肝炎RT-nPCR和ELISA检测方法

ICS11

B11

备案号30980—2011

:

上海市地方标准

DB31/T531—2011

动物戊型肝炎RT-nPCR和

ELISA检测方法

DetectionmethodofhepatitisEinanimalsbyRT-nPCRandELISA

2011-04-19发布2011-08-01实施

上海市质量技术监督局发布

DB31/T531—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由上海市畜牧兽医办公室提出

。

本标准由上海市畜牧业标准化技术委员会归口

。

本标准起草单位上海市动物疫病预防控制中心上海科华生物工程股份有限公司

:、。

本标准主要起草人刘佩红周锦萍王缦张维谊李凯航刘健鞠厚斌薛霞邓波祝长城

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T531—2011

动物戊型肝炎RT-nPCR和

ELISA检测方法

1范围

本标准规定了动物戊型肝炎病毒核酸的反转录套式聚合酶链反应检测方法以

(HEV)(RT-nPCR)

及动物血浆和血清中戊型肝炎抗体的酶联免疫吸附试验检测方法

(ELISA)。

本标准适用于动物戊型肝炎的诊断检测监测和流行病学调查

、、。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3符号

下列符号适用于本文件

。

碱基对

bp:。

光密度

OD:。

开放阅读框

ORF:。

4原理

本标准的方法针对保守区域设计两对特异引物即内外套引物进

RT-nPCRHEVORF2PCR,、,

行两轮扩增第一轮扩增用外套引物其生成的扩增产物进入第二轮扩增第二轮扩

PCR。,PCR,PCR

增用内套引物又称套式引物通过两轮扩增增加检测的敏感性和特异性适用于模板浓度低

(),PCR,,、

病毒含量少的核酸检测

HEV。

本标准的方法是双抗原夹心以的和融合抗原包被微孔反应

ELISAELISA,HEVORF2ORF3

板加入待检样本再加入辣根过氧化物酶标记的保守抗原片段如果样本中含有

,,(HRP)HEV。HEV

抗体则能与包被在反应板上的融合抗原和酶标保守抗原片段结合形成抗原抗体抗原

,HEV,“---HRP

复合物加入底物产生显色反应反之则无显色反应

”,,。

5RT-nPCR检测方法

51试验环境

.

环境干净并分区即分为试剂制备核酸提取核酸扩增和产物分析四个区

,:、、。

52仪器和设备

.

扩增仪核酸电泳仪电泳槽水浴锅紫外凝胶成像系统或紫外透射仪离心机离心速度

PCR、、、、()、(

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