GB/T 16285-1996 食品中葡萄糖的测定方法 酶-比色法和酶-电极法

GB/T16285-1996

前言

食品中葡萄糖的测定方法，一般采用《国际食搪分析方法统一委员会》规定的兰“一埃农法”(Lane

andEynon'smethod)和姆“松一华尔格法”(MunsonandWalker'smethod)，即菲林氏溶液氧化还原滴定

法。此法虽沿用已久，但测定结果只是近似值。因使用菲林氏溶液滴定葡萄糖(还原搪)时，其他具有还

原能力的单搪会干扰测定结果。本标准采用的酶一比色法和酶一电极法是在检索了近20年107篇国外文

献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。酶一比色法和酶一电极法使用的葡萄糖氧化酶(GOD)具有专

一性，只能催化葡萄糖水溶液中的3(-D-葡萄糖起反应(被氧化)，因此测定结果是真实值。

本标准的酶一比色法为仲裁法;酶一电极法为快速法。

本标准的附录A,附录B都是标准的附录。

本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位:中国农垦北方食品监测中心(酶一比色法);山东省科学院生物研究所(酶一电极

法)。

本标准经全A[食品工业标准化技术委员会秘书处审核。

本标准主要起草人:张宗城、刘宁、冯德荣、孙士青、宋家华、郝煌。

中华人民共和国国家标准

食品中葡萄糖的测定方法

GB/T16285-1996

酶一比色法和酶一电极法

Methodfordeterminationof口ucose加food

-Enzyme-colorimetr阮.dh目andenzyme-electrodemethod

，范围

本标准规定了用酶一比色法和酶一电极法测定食品中葡萄搪的方法。

本标准适用于各类食品中葡萄糖的测定;亦适用于食品中其他组分转化为葡萄糖的测定。

本标准酶一比色法的最低检出限量为。.01pg(葡萄糖/mL(试液);酶一电极法的最低检出限量为

1.0mg/100mL,

2酶一比色法

2.1原理

葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化卜D-葡萄糖(葡萄搪水溶液状态)氧化，生成D-葡萄糖酸

-a一内醋和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色醒亚胺。在

波长505nm处测定酿亚胺的吸光度，计算食品中葡萄糖的含量

Cc。HH,I,:O0,。++002:-i塑C,H,,O.+HZO2

HH,:O0z:++Cc6，HH,。O阳H++Ccl，HHl:NN,3OonPODc6H,NO+HY0

2.2试剂

2.2.1组合试剂盒

1号瓶:内含。.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0)100mL，其中4-氨基安替比林为

0.00154mol/L;

2号瓶:内含。.022mol/L苯酚溶液100mL,

3号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)400U活力单位)、过氧化物酶(辣根，peroxidase)

1000U活力单位)。

1,2,3号瓶须在4℃左右保存。

2.2.2酶试剂溶液:将1号瓶和2号瓶的物质充分混合均匀，再将3号瓶的物质溶解其中，轻轻摇动

(勿剧烈摇动)，使菊萄糖氧化酶和过氧化物酶完全溶解。此溶液须在4℃左右保存，有效期1个月。

2.2.30.085mol/L亚铁氰化钾溶液:称取3.7g亚铁氰化钾K〔4Fe(CN),·3H,O,GB1273，分析纯]，

溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。

2.2.40.25mol/L硫酸锌溶液:称取7.7g硫酸锌(ZnSO,·7H,O,GB666，分析纯)，溶于100mL重

蒸馏水中，摇匀。

2.2.50.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于1000mL重蒸馏水中，摇

匀。

2.2.6葡萄糖标准溶液:称取经10。士20C烘烤2h的葡萄糖(HG3-1094，分析纯)1.0000g,溶于重

一~~~~~，~~--~--州.~~~-

国家技术监督局1996一04一10批准1996一12一01实施

GB/T16285-1996

蒸馏水中，定容至100ml，摇匀将此溶液用重蒸馏水稀释叭。。一叭。。，即为200pg/mL葡萄搪标准

溶液。

2.3仪器和设备

实验室常规仪器及下列各项:

2.3.1研钵或粉碎机。

2.3.2分析筛。

2.13组织捣碎机。

2.3.4恒温水浴锅。

2.3.5可见光分光光度计。

2.3.6微量移液管:1.00mL，精度。.01mLe

2.4试样的制备

2.4.1固体样品

粉末状样品:取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。

颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100目分析筛，置于

密闭的玻璃容器内。

新鲜水果、蔬菜等固体样品:取有代表性的可食部分至少2009，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻

璃容器内。

2.4.2糊状样品

取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。

2.4.3固液体样品

取有代表性的样品至少2009，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容