GB/T 25165-2010 明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法

ICS65．020．30

B43

雪亘

中华人民共和国国家标准

25165—2010

GB／T

明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法

实时荧光PCR法

ofidentificationofandderived

Protocolbovine，caprine，ovineporcine

materialsintimePCRmethod

gelatin--Real

201

2010-09-26发布1-05-01实施

宰瞀鹊鬻瓣訾矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会仪19

25165—2010

GB／T

前言

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：陈颖、吴亚君、袁飞、王晶、徐宝梁、张舒亚、杨海荣、王斌、赵勇胜。

25165—2010

GB／T

明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法

实时荧光PCR法

1范围

本标准规定了明胶中牛、羊、猪源性成分的实时荧光PCR检测方法。

本标准适用于明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测。

该方法的检出限为0．1％。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB

6783食品添加剂明胶

GB／T14699．1饲料采样

GB／T27403--2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3．1

realtime

实时荧光PeRPCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。

3．2

threshold

Ct值cycle

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4原理

利用实时荧光PCR技术，根据不同物种的特异性基因序列对牛、羊、猪源性成分进行鉴定。利用裂

解液破碎细胞，酚、三氯甲烷抽提蛋白质，异丙醇沉淀得到DNA；以提取的DNA为模板进行内参照基

因的实时荧光PCR检测，以确定样品DNA的提取效率；通过特异性引物和标记荧光物质探针进行牛、

羊、猪源性成分的实时荧光PCR扩增，根据PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的强弱判