GB 31660.4-2019 动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

GB31660.4—2019

食品安全国家标准

动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕

酮残留量的测定液相色谱-串联质谱法

Nationalfoodsafetystandard-

Determinationofmegestrolacetateandmedroxyprogesteroneacetate

residuesinanimalderivedfoodsbyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

2019-09-06发布2020-04-01实施

发布

GB31660.4—2019

前言

本标准系首次发布。

GB31660.4—2019

食品安全国家标准

动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留检测的制样和液相色谱-

串联质谱测定方法。

本标准适用于猪、牛、羊肌肉、脂肪、肝脏、肾脏和牛奶中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕

酮残留量的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样中残留的醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮经乙腈提取，正己烷除脂，混合阳离子柱净

化，甲醇洗脱，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

4试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.1.2甲醇（CH3OH）。

4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

4.1.4乙酸（CH3COOH）。

4.1.5正己烷（C6H14）。

4.1.6乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。

4.1.7乙酸铵（CH3COONH4）。

4.2溶液配制

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GB31660.4—2019

4.2.10.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g，加水900ml使溶解，用乙酸调pH值至5.2，

加水稀释至1000mL。

4.2.22%甲酸水溶液：取甲酸2mL，加水溶解并稀释至100mL。

4.2.30.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL，加水溶解并稀释至1000mL。

4.2.450%甲醇水溶液：取甲醇50mL，加水溶解并稀释至100mL。

4.2.530%甲醇水溶液：取甲醇30mL，加水溶解并稀释至100mL。

4.2.60.1%甲酸水乙腈溶液：取0.1%甲酸水溶液20mL，加乙腈溶解并稀释至100mL，混

匀。

4.3标准品

4.3.1醋酸甲地孕酮（Megestrolacetate,C24H32O4,CAS:595-33-5）、醋酸甲羟孕酮

（Medroxyprogesteroneacetate,C24H34O4,CAS:71-58-9），含量均≥98.0%。

4.3.2内标：氘代醋酸甲地孕酮（megestrolacetate-D3,C24H29D3O4），含量≥98.0%。

4.4标准溶液制备

4.4.1标准贮备液：取醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮标准品各约10mg，精密称定，于100mL

棕色量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为0.1mg/mL的醋酸甲地孕酮、醋酸甲

羟孕酮标准贮备液。-20℃保存，有效期6个月。

4.4.2内标贮备液：取氘代醋酸甲地孕酮标准品约10mg，精密称定，于100mL棕色量瓶

中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成0.1mg/mL的氘代醋酸甲地孕酮贮备液。-20℃保存，

有效期为6个月。

4.4.3混合标准工作液：精密量取醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮标准贮备液各0.5mL，于

50mL棕色量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度均为1µg/mL混合标准工作液。4℃以

下避光保存，有效期1个月。

4.4.4内标工作液：精密量取内标贮备液0.5mL，于50mL棕色量瓶中，用乙腈稀释至刻

度，配制成浓度为1µg/mL的内标标准工作液。4℃以下避光保存，有效期1个月。

4.4.5标准曲线的制备

精密量取适量混合标准工作液及内标标准工作液，用流动相稀释配制成浓度为２、5、25、

50、100ng/mL的系列标准溶液（内标均为20ng/mL）。以特征离子质量色谱峰面积比为纵

坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4.5材料

4.5.1混合阳离子固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。

4.5.2β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。

4.5.3微孔滤膜：0.22µm。

5仪器和设备

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GB31660.4—2019

5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。

5.3氮吹仪。

5.4旋涡混合器：3000r/min。

5.5超声波萃取仪。

5.6移液枪：200µL，1mL，5mL。

5.7离心机：10000r/min。

5.8梨形瓶：100mL。

5.9旋转蒸发器。

5.10固相萃取装置。

6试料的制备与保存

6.1试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。脂肪组织于60℃水浴中融化。

——取均质后的供试样品，作为供试试料