WS/T 361-2011 乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法

ICS11020

C50

中华人民共和国卫生行业标准

Ws/T361-⒛

ll

乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法

lactatedehydrogenase

2011-12-14发布2012-06-o1实施

中华人民共和国卫生部发布

、Vs/T361-ˉ

2011

亠

刖曰

本标准按照GB/T1.1—⒛09给出的规则起草。

修改用际医联(JCTLM)批I「CC37℃

本标准采由国检验学溯源合委员会准的《酶催化活性浓度测

定原级参考方法第3部分:乳酸脱氢酶催化浓度测定参考方法》,丿仁参IsO15193:2009《

考体外诊断

器具——生物源样品中量的测定——参考测定程的》

序表述适当增加内容。

本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。

本标准起草单位:茼都医科大学附属北京朝阳医院。

本标准主要起草人:贾敏、王

慧赵书弘、涛、。

清杨振华

、Vs/T361-ˉ2011

乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法

1范围

本标准规定了在临床医学应用中,测定乳酸脱氢酶(△DH)催化活性浓度的参考方法。

本标准主要适用于参考实验室,作为乳酸脱氢酶催化活性浓度测定的溯源,也可作为与酶催化活性

浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源,可供有关认可单位及质量管理部门应用。

2术语和缩略语

2.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1.1

原始样本primarymmpIe

最初从一个系统中取出的一个或几J个部分的集合物,旨在提供该系统的信息或作为对该系统做出

决定的基础。

、以一统一统,此时取样系统是这些系统的组成部分。

注:在些况下所提供的信息可适用于个较大的系或组系

某情

2.1.2

室e

实验样本Iabc,ratorymmp【

准各送到实验室或实验室接收的川于测定的原始样本或原始样本的分样本。

2,1.3

分析样本anaIyticaIsample

可从取的。`

白实验室样本制备的、巾出分析部分样本

,分处

注:在取出分析部分之前析样本可经过各种理。

2.1.4

彡/9,kanaIyticaIportion

卜+f音阝

从分析样本中取出的用于实际测定和观察的物质部分。

注:如果不需预处理,分析部分亩接从原始样本或实验室样本中取出。某些怙况下,需将分析部分溶解成分析溶液

冉上机测定。

2.1,5

分析溶液anaIyticaIsolution

将分析部分溶解在气体、液体或固体巾而制备的溶液,溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。

21.6

(某一物质系统的)基质matriX(ofamateriaIWstem)

一个物质系统中除被分析物之外的所有成分。

2,1.7

参考方法referenceprocedure

在校准或表征标准物质时为提供测定结果所采用的测定方法,适用丁评定由同类量的其他测定方

法获得的被测定量值的测定止确度。

ˉ

Ws/T361ˉ2011

2,1,8

gsystem

测定系统的灵敏度变nsitivityofameasuriⅡ

灵敏度scnsitivity

测定系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。

注1:测定系统的灵敏度可能与被测定的蚩值有关。

注2:所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力。

2.1.9

彡卜lf卡手anaIyticalspecificity

乒旮l±

测定方法只测定可测定的量的能力。

2.1.10

分析干扰anaIyticaIinterference

由一个影响量引起的系统测定误差,该影响壁向身在测定系统中不产生信号,但它会引起示值的增

高或降低。

2.1,11

口

最彡向量莨infIuencequantity

被测定以外的可影响测定结果的壁。

2.1.12

被测量measurand

拟测定的量。

注1:对被测定的说明要求了解量的种类,以及含有该的现、状,包

址象物体或物质态的描述括有关成分及所涉及

n勺化学实体。

注2:在VIM第二版和IEC60θ5lls0θ01中.被

:⒛测定定义为受到测定的量。

注3:测定包括测定系统和实施测定,它刂,使

的条件能会改变研究屮的现、

象物体或物质被测定的坩町能不同于

义的被测。。

定定在这种情况卜适肖的修正楚必耍的‘

2.1.13

Ⅱ

mit,Ⅱmitofdetection

检出限detection

由给定测定方法获得的测得值,其声称的物质成分不存在的误判概率为称物质成分存在的误

α

判概率为。`,声

lT论(1UPAC)推

注1:国际±和应用化学联会α0,05。

合荐和卩的默认值为

注2:有时使用缩写词L()D。

“”“

注3:不要用术语灵敏度表示检出限"。

2.1.14

校准品caIibrator

用丁校准的测定标准。

2.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

LDH:乳酸脱氢酶(lac1a1eclehydrogemse)

ALT:丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase)

AST:大酸(aspartateaminotra灬

门冬氨氨基转移酶ferase)

NAD:氧二(β-nic°

化型烟酰胺1inamide~adeninedinucle。

β腺嘌呤核苷酸tide,oxidizedforn1)

NADH:还原型β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β-ni∞

IFCC:国际临床化学与检验医学联合会

laboratorvmedicine)

S()P:标准操作方法(s1andardopera1ionprocedure)

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2011

3参考方法描述

3.1测定原理和方法

,生丙酮,同NAl)还NADH、反应式如下:

本法采用乳酸脱氢酶催化乳酸成酸时原成

翌

L-(+)-孚1酸+NΛD|竺丙酮酸+NΛDH+H

在339nm下,监测NAD的还原速率,吸光度的上升速率与LDH催化活性浓度呈正比。

3.2检查列表

3.2.1试剂列表

l列

将所用试剂按表出。

表1试剂列表

通用名称.缩略语

N-甲基-D-葡萄糖胺甲葡胺,MEG

L(+)-乳酸,一锂盐

二.氧,游NAD游炱

β烟酰胺腺嘌呤核苷酸化型离酸离酉

烟酰胺腺嘌呤二核苻酸,氧化型,二水合钾盐NΛD钾盐

β

质量与双蒸水类似的高纯度水(电导率

(0.1mg·

<2uS·cml,pH6~7。I'l)

硅酸盐

JCTLM和(或)同家批准的参考物质

常规系统校准品

3,2.2分光光度计和辅助仪器列表

(分)和(点pH计

参考实验室应在表2登记主要测定仪器光光度计主要辅助仪器式温度计、天平、、

、器)。

恒温水浴箱、稀释配液仪移液等

表2分光光度计和辅助仪器

仪器名称1i产厂家|型

分光光度计

点式温度计

恒温水浴箱

稀释配液仪

ˉ

Ws/T361ˉ2011

3.3试剂

3.3.1试剂原料信息

按表3详细填写试剂原料详细信息。

表3试剂原料详细信息

试剂系统名通用名`

信息指标内容

(讠s,CΛ

ΛRN注册号

生产厂家

货号/批弓

分子式

相对分子质量

纯瘦

特定合格要求(如有)

危险度

贮存要求

失效期

LDH测定所用每个试剂原料详细信息表格见附录B。如怀疑一种化学药品含有不纯的物质影响

了分析物的催化活忤,应进行进一步的研究,例如,比较不同厂家和不同批号的产品。建议使川在对比

试验中已经鉴定或认町的试剂。以下一种试剂需耍注意安伞:

盐酸:健康危害:接触其蒸气或烟雾,可引起急性中毒,出现眼结膜炎,鼻及口腔黏膜有烧灼感,鼻

衄、出血,气

齿龈管炎等。误服可引起消化道灼伤、溃疡形成,有可能引起胃穿孔、腹膜炎等。眼和皮肤

接触可致灼伤。慢性影响:长期接触,引起慢性鼻炎、慢性支气管炎、牙齿酸蚀症及皮肤损害。操作人员

必须经过专门培训,严格遵守操作规程,佩戴自吸过滤式防毒面具(全面罩),穿橡胶耐酸碱服i戴胶

橡耐

酸碱手套。远离易燃、可燃物。

3.3.2试剂溶液

3.3,2,1一般要求

制备溶液时各成分给出的质量是指100%含量。如果化学物质的含量低于100%E例如y(%)],则

lAl子

应用:F(。出

mt"=100/y,计出

算与给质量相当的某化学物质的质量。

溶液的制备应使用质量与双蒸(电<2us·

水类似的高纯度水导率cml,pH6~7,硅

酸盐

(0.1mg·l)。

Lˉ

每次称重的扩展(虑=2)不确定度(包括物质纯度的不确定度)(正态分布).应≤1.5%。

3,3,2.2反应溶液

称量7.30gN-甲基-D-葡0.552g乳

糖胺、酸一锂盐,将上述物质按以下步骤处理:

——溶在约80mI'水

中;

——2m°l·Ll的pH(37℃

用盐酸调节)歪9.4;

刂

4

、Vs/T361-ˉ

2011

——至100mL容瓶

转移量中;

——将容量瓶和水平衡至⒛℃;

——加水(20℃)至容量瓶的刻度线。

N-甲-D-葡373,8mmol·

最配的基Ll、一57.50mmol·

终制溶液中糖胺浓度为L酸锂L1

孚盐浓度为

该2℃~8℃1个

溶液稳定忤为月。

3.3,2,3起始试剂溶液

称量0.240gNAD游酸及0,558gNAD二,将

离水合锂盐⊥述物质按以下步骤处理:

——溶于约6mL水;

中

——转至10mL容瓶

移量;

——将容量瓶和水平衡至⒛℃;

——加水(2O℃)至刻度线。

N`0游36.23mmd·

最终配制的溶液中离酸浓度为LI、NΛD二水合锂盐浓度为m。78mmd.I'l。

该溶液2℃~8℃l月

稳定性为。

注1:在配起试,只NAD游,不NΛD锂(如

制始剂溶液时用离酸川耠IFCC30℃参考方法)会适度地降低终反应混

pH值NAD游

合液的。起始溶液含有离酸和NAD锂盐的优点有:一是反pH值

终应混合液的不会低;二

降

.然

是NAD吸光度的变化强烈依赖pH值而,由pH值nF引:白

于的变化丨起的吸光度的丨发

变化并丨然:。困

'丨

此,如果NAD游离酸被为起加人碱反,刃4min~6min仍

作始溶液到忤应溶液巾么试空白

阝剂率在为|线r+。

如果起反NAD游NAD钾

但始应溶液包含离酸和两,将

盐种物质大大减小这种彩响.

注2:上述推荐的NΛD游离酸和NΛD锂棍(到10℃)可

盐合物解相当缓慢。

溶升温庋加。

高速溶解过程

3.3.3温度对缓pH的

冲溶液影响

当温度偏离37℃)卩寸,调节pH值:将pH电

的方法温度计与极同时浸人混合液中。然后将溶液边

搅拌边滴定至表中列举在当前测定下的pH值pH的

温度。校、,搅

在准控制和调节过程中拌速度耍一

pH电

致。极应位于被搅拌溶液的中心。

应考虑到在调pH的,温

节滴定过程中度是可能改变的囚素。为此,接近靶值时应重新控制温度,

如果需要,根据附录A调辂pH靶。的也pH训·

值同样方法适用于的温度补偿调节。

配制反应溶液时,需根据不同温调pH值A来pH值

度整。参阅附录调节溶液的。

3.4仪器

分光光度计及辅助仪器主要性能的要求,见表4。

表4分光光度计、助主

辅仪器要性能的要求

仪器名称性能指标ⅡCC参考方法要求

波长准确度/nm339±1(虍=2)

分光光度计、件带宽nm≤2

≤

`吧

光径/mm

pH计

点式温度汁

ˉ

Ws/T361ˉ2011

3,5采样和样本

3,5,1通则

,不ml,一不需考虑分析前因素对样本特性的影响。

参考实验室主要接受外检样本白行采般

3.5,2对收检样本的要求

官以表格肜式记录样本的详细信息,见表5。对不符合样本收检要求的样本应及时与委托方联系。

表5LDH收检样本要求

要求指标内容

可接受样本种类□血l清□lll浆□贝他

町接受样本类型□冻干粉□液体□冰冻□其他

皋质类型说明□人血清□牛血清□水□其他

样本最低数且攴

每支样本最低体积每支mL

允许添加物

运输条件□干冰□常温□冰袋□其他

贮存条件□常温□4℃□—zO℃□-70℃∶□共他

稳定性

危险性

注意事项

3.6测定系统和分析部分的准备

3.6.1测定系统的准备

3,6.1.1分光光度计准备

测定T作前,按已制定的S0P文件对分光光度计进行检查,填写表6。

表6分光光度计准备

准备事项具体内容

独h开

□电源□接地□电脑□打印机□是否机

丌机前检查

□温度□湿度□机身洁洁□比色仓洁洁□比色窗洁洁

恒温装置:□与分光光度汁迕接完辂□提前开机

测温装置:□电±□测温探头勿挤爪、碰撞坚硬物体

组合

搅拌装置:□洁洁□转速

比色杯:□完整□清沽度

光源灯:□提前预热

开机注总节项

比色杯:□光径□比色杯问匹配

6

、Vs/T361-ˉ2011

表6(续)

准备节项艮体内容

核实楚否在田家计量机构检定