DB4201/T 543-2018 奶牛早期妊娠诊断的荧光定量PCR检测方法

ICS65.020.01

B40

DB4201

武汉市地方标准

DB4201/T543—2018

奶牛早期妊娠诊断的荧光定量PCR检测方法

2018-08-28发布2018-09-28实施

武汉市质量技术监督局发布

DB4201/T543-2018

前言

本规范按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由武汉市农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：武汉市农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：程蕾、向敏、王定发、胡修忠、刘晓华、余婕、周源、万平民、凌明湖。

本规范首次发布。

I

DB4201/T543-2018

奶牛早期妊娠诊断的荧光定量PCR检测方法

1范围

本标准规定了奶牛早期妊娠的荧光定量PCR检测方法原理、试剂和材料、仪器和设备、测定方法、

卫生要求以及废弃物处理。

本标准适用于一级生物安全水平（BSL-1）以上的兽医实验室，用于奶牛人工授精后第18天是否妊

娠的诊断性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标

准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

早期妊娠

奶牛妊娠初期，又称早孕。此阶段正是受精卵向胚胎剧烈分化的重要时期。

3.2

荧光定量PCR

荧光聚合酶链反应。

3.3

Ct值

循环阈值，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

3.4

ISG15

干扰素刺激基因15。

1

DB4201/T543-2018

3.5

RSAD2

病毒抑制蛋白。

3.6

RNA

核糖核酸。

3.7

cDNA

互补脱氧核糖核酸。

3.8

bp

碱基对。

3.9

ddH2O

双蒸水。

3.10

P值

诊断点，判断为妊娠的临界值。

4方法原理

利用荧光定量PCR技术联合检测奶牛外周血白细胞中干扰素刺激基因ISG15和RSAD2的表达量，通过

方法换算来判断早期妊娠。

5试剂和材料

试剂和材料包括：

——双蒸水（应符合GB/T6682中一级水规格）；

——商业化血液总RNA提取试剂盒（应适用于新鲜的全血）；

——商业化反转录试剂盒；

——荧光定量