DB35/T 1854-2019 蜜蜂以色列急性麻痹病毒病诊断技术

ICS11.220

B41

DB35

福建省地方标准

DB35/T1854—2019

蜜蜂以色列急性麻痹病毒病诊断技术

DiagnostictechniquesforIsraeliacuteparalysisvirusofhoneybees

2019-09-11发布2019-12-11实施

福建省市场监督管理局发布

DB35/T1854—2019

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3缩略语............................................................................1

4疾病概述..........................................................................1

5临床诊断..........................................................................2

6实验室诊断........................................................................2

7结果判定..........................................................................5

附录A（规范性附录）溶液的配制......................................................7

附录B（资料性附录）参考序列........................................................8

附录C（资料性附录）核酸扩增电泳图..................................................9

I

DB35/T1854—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由福州海关提出并归口。

本标准起草单位：福州海关、海口海关、福建农林大学、长春海关、厦门瑞德利校准检测技术有限

公司、东莞市中鼎检测技术有限公司、福建省国鼎检测技术有限公司。

本标准主要起草人：张体银、郑腾、李丹丹、王武军、张志灯、黄少康、宋战昀、廖善胜、白泉阳、

林杰、于师宇、曹维强、李厚标。

II

DB35/T1854—2019

蜜蜂以色列急性麻痹病毒病诊断技术

1范围

本标准规定了蜜蜂以色列急性麻痹病毒病的疫病概述、临床诊断、实验室诊断和结果判定。

本标准适用于蜜蜂以色列急性麻痹病毒病的诊断和蜜蜂以色列急性麻痹病毒感染的监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct值：循环阈值（CycleThreshold）

DEPC：焦碳酸二乙酯（DiethyPyrocarbonate）

dNTP：三磷酸脱氧核苷酸（DeoxynucleosideTriphosphate）

EB：溴化乙锭（EthidiumBromide）

IAPV：以色列急性麻痹病毒（IsraeliAcuteParalysisVirus）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）

TBE：三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸（TrihydroxymethylAminomethane-BoricAcid-

ethyleneDiamineTetraaceticAcid）

4疾病概述

以色列急性麻痹病毒病是由IAPV引起的一种常见的蜜蜂病毒病，可侵染各个发育时期的蜜蜂个体

（卵、幼虫、蛹、成蜂）和蜂群各级型蜜蜂（工蜂、雄蜂和蜂王），给蜂群造成重大损失，对蜜蜂养殖

业危害大，目前该病在全球大部分地区分布。

IAPV属于小核糖核酸病毒总科（Picornaviridae），病毒基因组是由9487个核糖核苷酸组成，它

的两个开放读码框被一个由184个核苷酸组成的基因间区域分开。靠5′端的开放读码框编码翻译与RNA

复制和蛋白质加工相关的、由1900个氨基酸构成的非结构性多聚蛋白质，靠3′端的开放读码框编码翻

译用于加工不同衣壳蛋白的、由944个氨基酸组成的结构性多聚蛋白。IAPV有两个内核糖体进入位点，

一个位于5′端非翻译区，另一个位于两个开放阅读框之间的基因间区域，在衣壳蛋白的起始翻译合成

时起介导作用。内核糖体进入位点介导的翻译起始机制降低了病毒对寄主的依赖性，这种机制被认为是

病毒破坏宿主蛋白质翻译合成过程的方式之一。

1

DB35/T1854—2019

5临床诊断

5.1临床表现

5.1.1临床健康的蜂群短时间内大量成年工蜂突然消失。

5.1.2在巢脾上只剩下蜂王、幼虫和一些未成年工蜂以及花粉等残留食物，且在蜂箱内并无死亡蜜蜂

的残存尸体，也没有其他寄生害虫的存在。

5.1.3蜜蜂个体感染早期腹部、胸部逐渐变黑，翅膀颤抖，在蜂箱外的空地上转圈，既不采食也不能

飞行。

5.1.4蜜蜂感染后期胸部绒毛脱落，最后麻痹抽搐而死。

5.2初步诊断

当蜂群出现5.1中部分或全部临床表现时，可做出初步诊断，确认需要进行实验室诊断。

6实验室诊断

6.1设备、材料和试剂

6.1.1设备

6.1.1.1普通PCR扩增仪。

6.1.1.2荧光PCR仪。

6.1.1.3台式冷冻高速离心机（12000r/min）。

6.1.1.4微量移液器（0.5µL～10µL、2µL～20µL、20µL～200µL、100µL～1000µ