DB43/T 959.2-2023 异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogen Free, DPF）医用供体猪 第2部分：微生物、寄生虫学监测

ICS70.080

CCSB44

43

湖南省地方标准

DB43/T959.2—2023

代替DB43/T959.2—2014

异种移植用无指定病原体（Designated

PathogenFree,DPF）医用供体猪

第2部分：微生物、寄生虫学等级与监测

MedicalgradeDPFdonorpigforxenotransplantation

Part2:mircrobiologicalparasitologicalstandardsandsurveillance

2023-11-09发布2024-02-09实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T959.2—2023

目次

前言························································································································Ⅲ

引言························································································································Ⅴ

1范围·····················································································································1

2规范性引用文件······································································································1

3术语和定义············································································································1

4微生物学等级·········································································································3

5检测要求···············································································································3

6检测程序···············································································································3

7检测方法···············································································································3

8检测规则···············································································································5

9结果判定···············································································································6

10判定结论··············································································································6

11样本保存··············································································································6

附录A（规范性）牛分枝杆菌PCR检测方法····································································7

附录B（规范性）细胞内鸟型分枝杆菌PCR检测方法························································8

附录C（规范性）新型隐球菌DNA实时荧光定量PCR检测··················································9

附录D（规范性）抗荚膜组织胞浆菌抗体ELISA检测方法················································10

附录E（规范性）猪兰氏类圆线虫病镜检法诊断····························································11

附录F（规范性）布氏姜片吸虫镜检法诊断··································································12

附录G（规范性）猪脑心肌炎病毒间接ELISA检测·························································13

附录H（规范性）人流感病毒多重PCR检测··································································14

附录I（规范性）猪巨细胞病毒FQ-PCR检测·································································15

附录J（规范性）疱疹病毒核酸检测···········································································17

附录K（规范性）猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS‐CoV）RT‐PCR检测··························19

附录L（规范性）猪呼吸道冠状病毒（PRCV）巢式PCR检测·············································20

附录M（规范性）猪血凝性脑脊髓炎病毒检测·······························································21

附录N（规范性）猪内源性逆转录病毒C（PERV-C）PCR检测···········································24

附录O（规范性）猪嗜淋巴细胞疱疹病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测····························25

附录P（规范性）新型冠状病毒肺炎防控方案（第七版）················································26

I

DB43/T959.2—2023

II

DB43/T959.2—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件是DB43/T959《异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,DPF）医用供体猪》

的第2部分。DB43/T959已发布了以下部分：

——第1部分：遗传质量控制；

——第2部分：微生物、寄生虫学等级与监测；

——第3部分：配合饲料；

——第4部分：病理学诊断规范；

——第5部分：环境与设施。

本文件替代DB43/T959.2—2014《异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,DPF）

医用供体猪第2部分：微生物学等级与监测》，与DB43/T959.2—2014相比，除结构调整和编辑性改动

外，主要技术变化如下：

a）将本文件“标题”由“异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,DPF）医用供

体猪第2部分：微生物学监测”更改为“异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,

DPF）医用供体猪第2部分：微生物、寄生虫学等级与监测”；

b）增加了“引言”一章；

c）增加猪圆环病毒1型、猪冠状病毒、猪内源性逆转录病毒、猪淋巴性疱疹病毒、戊型肝炎病毒、

新型冠状病毒的检测及检测方法（见7，2014版的7）；

d）更改了“检测频率”（见8.1，2014版的8.1）；

e）更改了“表2抽样数量”（见8.2.2，2014版的8.2.2）。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由湖南省科学技术厅提出并归口。

本文件起草单位：中南大学湘雅三医院，湖南赛诺生物科技股份有限公司。

本文件主要起草人：王维、罗敏华、李桑、蔡亮、胡鹏志、马小倩、徐畅、王佳、石兴勇。

本文件及其所替代文件的历次版本发布情况为：

——2014年首次发布为DB43/T959.2—2014；

——本次为第一次修订。

III

DB43/T959.2—2023

IV

DB43/T959.2—2023

引言

异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,DPF）医用供体猪标准化能更好的促进异

种细胞、组织和器官移植相关产业发展，有利于湖南省政府部门行政审批和监管工作的实施。为了保证

异种移植用无指定病原体医用供体猪研发、生产和应用的稳定、高效进行，对其进行标准化管理已成为

首要任务。在这方面，湖南省已建立了异种移植用无指定病原体医用供体猪基础性地方标准体系。在该

体系中，DB43/T959《异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogenFree,DPF）医用供体猪》是

指导湖南省异种移植用无指定病原体医用供体猪培育的基础性和通用性的标准。DB43/T959旨在确立普

遍适用于标准化异种移植用无指定病原体医用供体猪遗传质量控制、微生物检测、饲料、病理学检测、

环境设施的准则，拟由五个部分构成。

——第1部分：遗传质量控制。目的在于维持异种移植用无指定病原体医用供体猪遗传质量稳定性。

——第2部分：微生物、寄生虫学等级与监测。目的在于保证异种移植用无指定病原体医用供体猪

生物安全性。

——第3部分：配合饲料。目的在于保障异种移植用无指定病原体医用供体猪饲料的安全和营养。

——第4部分：病理学诊断规范。目的在于标准化异种移植用无指定病原体医用供体猪病理学检测

内容和方法。

——第5部分：环境与设施。目的在于标准化异种移植用无指定病原体医用供体猪环境条件控制和

设施建设。

异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄生虫学监测是决定异种移植成功与否的关键性因素

之一。为了做好这项工作，湖南省在2014年发布了有关异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄

生虫学监测的地方标准。DB43/T959.2发布实施已九年，这期间国际异种移植领域取得了突破性成果，

异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄生虫学监测受到越来越广泛的重视，与微生物、寄生虫

监测有关的理论研究和实践都发生了变化。首先，世界卫生组织于2018年在湖南省长沙市召开了“第三

届全球异种移植临床研究规范研讨会”，对异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄生虫检测项

目和方法进行深入探讨。其次，在DB43/T959.2的广泛应用以及实践期间，非洲猪瘟病毒、新型冠状病

毒等席卷中国，对异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄生虫学监测项目和内容产生了新的需

求与建议。鉴于此，确有必要修订完善DB43/T959.2，以不断监测国内外猪流行性疾病的新变化，确保

高质量、高安全性异种移植用无指定病原体医用供体猪的稳定发展。

对异种移植用无指定病原体医用供体猪微生物、寄生虫学监测进行标准化，首先需要排除已知和潜

在的引起异种移植跨种系感染风险微生物；其次是应根据近几年猪流行性疾病调查，及时更新病原体检

测内容与方法，以保证异种移植用无指定病原体医用供体猪稳定发展。本次对DB43/T959.2的修订，

重点考虑了异种移植跨种系感染微生物和最新猪流行性疾病病原体检测，通过排除异种移植用无指定病

原体医用供体猪微生物、寄生虫感染风险，保障异种移植用无指定病原体医用供体猪安全性，进一步提

高异种移植的成功率，从而全面提升我国异种移植发展水平。

V

DB43/T959.2—2023

异种移植用无指定病原体（Designated

PathogenFree,DPF）医用供体猪

第2部分：微生物、寄生虫学等级与监测

1范围

本文件规定了异种移植用无指定病原体（DesignedPathogenFree,DPF）医用供体猪微生物学等

级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、判定结论、样本保存等。

本文件适用于异种移植用DPF医用供体猪微生物学等级监测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T14926.1实验动物沙门菌检验方法

GB/T14926.4实验动物皮肤病原真菌检测方法

GB/T14926.8实验动物支原体检测方法

GB/T14926.27实验动物小鼠腺病毒检验方法

GB/T14926.30实验动物兔轮状病毒检测方法

GB/T14926.46实验动物钩端螺旋体检测方法

GB/T14926.47实验动物志贺菌检测方法

GB/T14926.48实验动物结合分枝杆菌检测方法

GB/T14926.56实验动物狂犬病病毒检测方法

GB/T16551猪瘟诊断技术

GB17013包虫病诊断标准及处理原则

GB/T18090猪繁殖与呼吸综合征诊断方法

GB/T18448.1实验动物体外寄生虫检测方法

GB/T18448.2实验动物弓形虫检测方法

GB/T18448.6实验动物蠕虫检测方法

GB/T18648非洲猪瘟诊断技术

GB/T18638流行性乙型脑炎诊断技术

GB/T18641伪狂犬病诊断技术

GB/T18646动物布鲁氏菌病诊断技术

GB/T18647动物球虫病诊断技术

GB/T18935口蹄疫诊断技术

GB/T19200猪水泡病诊断技术

GB/T19915.1猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程

1

DB43/T959.2—2023

GB/T19915.2猪链球菌2型分离鉴定操作规程

GB/T19915.3猪链球菌2型PCR定型检测技术

GB/T19915.7猪链球菌2型荧光PCR检测方法

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法

GB/T22333日本乙型脑炎病毒反转录聚合酶链反应试验方法

GB/T22915口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法

GB/T22917猪水泡病病毒荧光RT-PCR检测方法

GB/T27517鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法

GB/T27536猪流感病毒分离与鉴定方法

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法

GB/T34757猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

GB/T35912猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法

GB/T36871猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法

NY/T537猪传染性胸膜肺炎诊断技术

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T545猪痢疾诊断技术

NY/T546猪传染性萎缩性鼻炎诊断技术

NY/T548猪传染性胃肠炎诊断技术

NY/T550动物和动物产品沙门氏菌检测方法

NY/T564猪巴氏杆菌病诊断技术

NY/T679猪繁殖和呼吸综合症免疫酶试验方法

SN/T0420出口猪肉旋毛虫检验方法磁力搅拌集样消化法

SN/T1379.1猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验

SN/T1396弓形虫病检疫技术规范

SN/T1446.1猪传染性胃肠炎阻断酶联免疫吸附试验

SN/T1699猪流行性腹泻检疫技术规范

SN/T1919猪细小病毒病检疫技术规范

SN/T2708猪圆环病毒病检疫技术规范

SN/T3499新孢子虫病检疫技术规范

SN/T4235猪戊型肝炎检疫技术规范

SN/T5124猪Delta冠状病毒检疫技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

异种移植用DPF医用供体猪medicalgradeDPFdonorpigforxenotransplantation

经人工饲养与培育，遗传背景明确或者来源清楚，12月龄体重宜不超过50kg，不携带世界卫生组

织（WorldHealthOrganization，WHO）指定供体动物应排除的潜在感染或条件致病和感染性人畜共患

疾病病原，必须利用生物安全屏障环境防止病原体感染，不得使用抗生素或疫苗，用于医用异种移植供

体、科学研究、教学、生产和质量控制鉴定以及其他科学实验的小型猪。

2

DB43/T959.2—2023

4微生物学等级

异种移植用DPF医用供体猪微生物学等级为医用供体无指定病原体级。

5检测要求

5.1临床观察

外观检查无异常。

5.2微生物检测项目

异种移植用DPF医用供体猪病原微生物检测项目见表1。

6检测程序

检测程序见图1。

图1异种移植用DPF医用供体猪检测程序

结合临床症状和实验室检查结果，需要进一步确证时，可取特定样本进行检测。

7检测方法

检测方法见表1。

3

DB43/T959.2—2023

表1异种移植用DPF医用供体猪病原微生物检测项目及检测方法

类型序号检测项目检测方法

1布鲁氏菌BrucellasppGB/T18646

2钩端螺旋体LeptospirasppGB/T14926.46

3猪痢疾蛇样螺旋体SerpulinahyodysenteriaeNY/T545

4牛型分枝杆菌Mycobacteriumbovis附录A

5结核分枝杆菌MycobacteriumtuberculosisGB/T14926.48

细胞内鸟型结核分枝杆菌复合物

6附录B

Mycobacteriumavium-intracelluarecomplex

细菌类

7猪肺炎支原体MycoplasmahyopneumoniaeGB/T14926.8

Bacterium

8沙门氏菌SalmonellatyphiGB/T14926.1；NY/T550

9志贺氏菌ShigellaGB/T14926.47

10支气管败血波氏杆菌BordetellabronchisepticaNY/T546

11多杀巴氏杆菌PasteurellamultocidaNY/T546；NY/T564

12猪胸膜肺炎放线杆菌ActinobacilluspleuropneumoniaeNY/T537

GB/T19915.1-3；

13猪链球菌2型Streptococcussuistype2

GB/T19915.7

14皮肤病原真菌PathogenicdermalfungiGB/T14926.4

真菌类

15新型隐球菌Cryptococcusneoformans附录C

Fungi

16荚膜组织胞浆菌Histoplasmacapsulatum附录D

17体外寄生虫EctozoaGB/T18448.1

18猪蛔虫AscarissuumGB/T18448.6

19棘球绦虫Echinococcussp.GB17013

20等孢球虫属IsosporaspGB/T18647

寄生虫类

21猪兰氏类圆线虫Strongyloidesransomi附录E

Parasites

22弓形虫ToxoplasmagondiiGB/T18448.2；SN/T1396

23旋毛虫TrichinellaspiralisSN/T0420

24新孢子虫Neospora