T/BDAS 001-2021 牛奶中褪黑素含量的测定 液相色谱-串联质谱法

范围:本文件规定了牛奶中褪黑素含量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素的测定。 本文件检测方法的检出限为0.04 μg/L，定量限为0.10 μg/L; 主要技术内容:本标准规定牛奶中褪黑素含量的测定液相色谱-串联质谱法，适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素含量的测定。提取方式：取适量样品置于超声波清洗机，37℃超声30 min,使样品充分混匀。准确移取1 mL试样置于15 mL离心管中，准确加入4 mL甲醇，使用旋涡混合仪振荡提取10 min，-18 ℃静置30 min。使用低温高速离心机以10000 g、4 ℃离心5 min，上清液过0.22 μm有机相滤膜过滤至样品瓶，获得试样溶液，供液相色谱-串联质谱测定。技术要点1：甲醇作为褪黑素溶剂，不但不会影响样品中目标物质的稳定性，还可以使得牛奶中蛋白变性沉淀。将待测样品和甲醇采用1:4混合，使用甲醇溶剂一步萃取法，无需净化，减少除脂过程造成的损失。技术要点2：牛奶及其奶制品中含有大量粒度大小不等的脂肪球，超声波（30 min）在液体中能产生空化作用，击碎牛奶中的脂肪球。旋涡混合仪振荡提取10 min，可以离心得到上机液，不损失褪黑素。技术要点3：牛奶中的褪黑素用甲醇提取后，用液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。本标准中规定了褪黑素的检出限为0.04 μg/L，定量限为0.10 μg/L；本标准方法的褪黑素回收率为：60~120%，依据GB/T 27404符合在一定浓度水平的回收率范围；相对偏差（RSD）≤20%