GB/T 16175-1996 医用有机硅材料生物学评价试验方法

Gs/T16175一1996

前言

本标准在制订过程中参考借鉴有关国际标准和国内外先进标准，对多种医用有机硅材料进行了实

验验证。本标准第2,3,5,6,7,8,9章参照采用拍O10993医疗器械生物学评价》系列标准，其余部分参

考国内外先进标准综合制定而成。这些试验方法基本可以满足对医用有机硅材料的生物学评价需求。对

于特殊用途材料的生物学评价，可参考本标准在选择指南中规定的补充生物学评价试验项目及试验基

本要求，按照有关国内外标准进行评价.

本标准由国家医药管理局提出。

本标准由国家医药管理局医用高分子产品质量检测中心归口.

本标准起草单位:国家医药管理局医用高分子产品质量检测中心、上海生物材料研究测试中心。

本标准主要起草人:由少华、薛森、刘秦玉、孙皎、王听、顾国珍。

中华人民共和国国家标准

医用有机硅材料生物学评价试验方法GB/T16175一1996

Organicsilcionmaterialformedicaluse-

Biologicalevaluat加.testmethods

1范围

本标准规定了医用有机硅材料的生物学评价试验方法。

本标准适用于医用有机硅材料的生物学评价。其他医用材料亦可参照采用。

2试验选择指南

2.1医用有机硅材料按其在临床使用部位和接触时间分类，按表1选择生物学试验项目。

2.2表1所列生物学试验不能满足材料生物学评价需求时，按表2选择补充评价试验项目。对于可能

影响机体生殖功能的材料，应补充做生殖和发育毒性;对可能在体内降解的材料应做生物降解试验。

注:表z所列补充评价试验项目本标准未规定试验方法可参照有关国际标准或国外标准进行评价。

2.2.1亚慢性毒性:该试验测定在大于24h但不超过试验动物寿命的10%的时间内，试验材料或浸提

液一次或多次作用的影响。试验应与实际使用情况相一致.

2.2.2遗传毒性:该试验用哺乳或非哺乳动物细胞培养技术测定材料或浸提液引起的基因突变、染色

体结构和数量的变化，以及对DNA(脱氧核糖核酸)的影响或其他遗传毒性。

2.2.3慢性毒性:该试验是在不少于试验动物寿命的10%的时间内，一次或多次将材料浸提液作用于

试验动物，测定对动物的影响。试验应与实际使用情况相一致。

2.2.4致癌性:该试验是在试验动物的寿命期内，一次或多次将材料或浸提液作用于动物，测定其致肿

瘤性。试验应与实际使用情况相一致。

2.2.5生殖和发育毒性:该试验评价材料或浸提液对生殖功能、胚胎发育及胎儿和早期婴儿发育的潜

在影响

2.2.6生物降解:该试验测定材料或浸提液的滤出物或降解物的吸收、分布、生物转化和消除过程。

国家技术监督局1996一03一07批准1996一10一01实施

GB/T16175一1996

表I医用有机硅材料生物学试验项目选择

材料分类生物学试验项目

接触时间:原发

A一时接触(G24h)细胞{皮内性皮口腔眼刺急性

过敏粘膜全身溶血热原植入

接触部位B短、中期接触毒性刺激肤刺激试

试验刺激毒性试验试验试脸

(>24h--30d)试验试验激试验

试验试验

C长期接触(>30d)验

AXXXX

皮肤BX又X又

i一

cXXXX

AXXXXX

表面接触一粘膜BXX又XX

一

cXXX’X

x

AXXX

}

损伤表面BXXX

cXXX

AXXXXXX

何接与

血液流路sXXXXXX

cXXXXX

AXXX

体外至体组织

BXXX

内接触/骨/牙

cXXX

}一

AXX一一XXXX

循环血液BXXXXX一{X

cXXXXXX

l

{

AXXX

组织/骨BXXX

CXXX

体内植入

AXXXX}XXX

血液BXXX}XXX

x一

cXXXXXXX

注:X为应选择项目.

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表2补充生物学评价试验项目选择

材料分类生物学试验项目

接触时间

A一时接触(<24h)

亚慢性生殖和

接触部位B短、中期接触遗传毒性慢性毒性致癌性生物降解

毒性发育毒性

(>24h-30d)

C长期接触(>30d)

A

皮肤B

C

A

表面接触粘膜B

cXX

A

损伤表面B

CXXXX

A

间接与

B

血液流路

cXXXX

{A

休外至体}组织

BX

内接触

一骨/牙‘cXX

A

}}

循环血液BX

CXXXX

A

组织/骨BX

}

CXXX

体内植入

A

血液BX

CXXXX

注:X为应选择项目。

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3材料漫提液制备方法

3.1浸提容器

3.1门浸提应在一洁净、化学惰性的封闭容器中进行，容器内顶部空间尽量小并保证安全性。

3.1.2浸提应在防止供试品污染的条件下进行。

3.2浸提条件

3.2.1浸提温度、时间和设备按实际使用情况选择表3所列条件的一种。

表3浸提条件

浸提温度，℃浸提时间，b浸提设备

37士124士2电热恒温培养箱

37士172士2电热恒温培养箱

50土272士2电热值温培养箱

70士224士2电热恒温干操箱

121士21士0.2电热蒸汽灭菌器

3.2.2供试品表面积或重量与浸提介质比例按表4规定。

表4供试品表面积或重量与浸提介质的比例

供试品厚度，mm表面积或重量与浸提介质体积比例

(0.56C.,In山

>0.5-1.03cm'/mL

>1.01.25cm'/mL

不规则形状0.2g/mL

3.2.3根据试验的不同需求选择下列浸提介质:

a)极性液体:水，生理盐水，无血清液体培养基;

b)非极性液体:新鲜提纯的植物油如〔棉籽油或芝麻油);

c)其他浸提液体:5%(V/V)乙醉水溶液,5YO(V/V)乙醉生理盐水溶液，聚乙二醇400(稀释至生理

渗透压)，二甲亚矾和含血清液体培养基。

3.2.4将供试品用自来水、燕馏水依次冲洗干净后滤纸吸干，切成5mmX30mm条状，置浸提容器

内，按规定量加入浸提介质，使液体浸没供试品。

3.2.5浸提液制备后存放应不超过24h.

4细胞毒性试验(细胞增殖度法)

4.1方法提要

本试验是将一定量的材料或浸提液加入细胞培养液中培养细胞，通过对细胞生长和增殖的影响来

评价材料对细胞的潜在毒性作用。

4.2试验样品的制备和要求

4.2门将材料薄片厚〔度-<lmm)用肥皂水清洗，重蒸馏水洗涤，滤纸吸干，医用不锈钢丝悬吊，高压蒸

汽灭菌或用紫外线灯照射灭菌3h(正反两面各1.5h),

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阳性对照:64g/L苯酚溶液。

:一:一;

阴性对照:含医用不锈钢丝的空白管。

4.3细胞株

推荐使用L-929细胞(小鼠成纤维细胞)，试验用细胞为传代48^-72h生长旺盛的细胞。

培养基与试剂

:一:.

Eagle'sMEM加入10%(V/V)小牛血清。

4.4.2磷酸盐缓冲液(P.B.S)

无钙镁的磷酸盐缓冲液100.0mL

酚红溶液10。mL

200g/L氯化镁溶液。.5mL

100g/L氯化钙溶液1.0mL

水加至1000mL

4.5试验步骤

4.5.1细胞悬液制备:用细胞培养基配制4万个/ML细胞悬液分注于试管内(1mL/管)，阴性对照组

13管((1管备用)，材料组10管(1管备用)，必要时设阳性对照组3管，置370C恒温培养箱中培养24h,

4.5.2材料浸提液制备:将细胞培养基按1cm,试样表面积10ml,的比例加人放有试样的试管中，

37℃下浸提24h,

4.5.3浸提液交换:24h后，每管舍弃原培养液，阴性对照组9管用新鲜培养液交换，阳性对照组用含

64g/L苯酚的细胞培养液交换，材料组用含500o(V/V)浸提液的新鲜培养液进行交换，并对三支阴性

对照管进行细胞计数，其余置37℃继续培养。

4.5.4细胞计数与吸光度侧定

4.5.4.1分别于2,4,7d将对照组和材料组各3管进行细胞计数或吸光度测定，以判断细胞的增殖

度。

4.5-4.2细胞计数法:用含拘摊酸的结晶紫罗兰染色，血球计数板在显微镜下计数.上下限不得超过

100o，否则重新计数。

4.5-4.3分光光度计测定吸光度法(仲裁法):弃去原细胞培养液，用P.B.S洗涤,10/(V/V)甲醛溶

液固定10min，水洗2-3次，加5g/L结晶紫罗兰1.5ML染色3min，水洗2-3次，加10g/L十二烷

基硫酸钠3.5mL，用分光光度计在波长588nm下测定吸光度。

46结果计算

46门细胞计数法:细胞计数经95%可信度的数理统计，得上限、平均数、下限，通过细胞计数计算相

对增殖度(RGR)，见式(llo

材料组平均值

RGR(%)二X100。.，..··……。.。·….…”(1)

阴性对照组平均值

4.6.2吸光度测定法:相对增殖度计算见式(2)e

材料组吸光度一空白对照吸光度

RGR(%)=X100”··········一(2)