DB45/T 2804-2023 猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术规程

ICS65.020.01

CCSB16

45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T2804—2023

猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术规程

Technicalcodeondiagnosisofbacterialcankerdiseaseofkiwifruitby

PCR

2023-12-26发布2024-02-01实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T2804—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出、归口并宣贯。

本文件起草单位：广西特色作物研究院。

本文件主要起草人：王明召、娄兵海、阳廷密、杨炎昌、唐明丽、门友均、何建军、宋雅琴、韩旸、

班世面。

I

DB45/T2804—2023

猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术规程

1范围

本文件确立了猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术的程序，给出了缩略语、诊断原理，规定了样品采

集、诊断方法、诊断后样品处理的操作指示，描述了技术档案作为追溯方法。

本文件适用于广西壮族自治区行政区域内猕猴桃属植物感染猕猴桃细菌性溃疡病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猕猴桃细菌性溃疡病bacterialcankerdiseaseofkiwifruit

由丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种（Pseudomonassyringaepv.actinidiae）引起的猕猴桃病害。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

bp：碱基对

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTPs：四种脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosidetriphosphate）的等摩尔混合物，包括

dATP、dGTP、dCTP和dTTP

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（Taqenzyme）

pH：氢离子浓度指数（Hydrogenionconcentration）

5诊断原理

利用猕猴桃细菌性溃疡病菌DNA特异性扩增引物，在热稳定DNA聚合酶的作用下，合成大量目标DNA

片段，最终通过凝胶电泳分离检测出特定大小的猕猴桃细菌性溃疡病菌特异性DNA谱带，根据该谱带的

有无确定样品是否带有猕猴桃细菌性溃疡病菌。

6样品采集

1

DB45/T2804—2023

6.1鉴定取样

6.1.1采有典型和疑似症状的植株叶片样品（参见附录A.1）、枝干样品（参见附录A.2）。

6.1.2幼龄树每株采5张叶片，成年树每株采20张叶片，枝干样品采10cm长一段、共3段，分样品

装入可密封塑料袋中，同时在密封袋中放入一小团无菌湿纸巾，冰块冷藏运输，3d内送实验室检测。

6.2监测取样

6.2.1采取Z字型五点取样法，每个点选取3株树采样。

6.2.2每株树在东、南、西、北四个方位采集叶片样品，幼龄树每方位采1张叶片，成年树每方位采

5张叶片，枝干样品采10cm长一段、共3段，样品保存于可密封塑料袋中，同时在密封袋中放入一小

团无菌湿纸巾，冰块冷藏运输，3d内送实验室检测；从同一株树上采集的所有叶片或枝干为一个样品。

7诊断方法

7.1试剂及要求

7.1.1要求

本文件所用试剂为分析纯，所有试剂均用高压灭菌的无菌容器分装。

7.1.2试剂

主要试剂见表1。

表1主要试剂

序号试剂

1液氮

2无水乙醇

3β-巯基乙醇

4植物基因组DNA提取试剂盒