GB/T 18204.4-2013 公共场所卫生检验方法 第4部分：公共用品用具微生物

ICS13.060

C51

中华人民共和国国彖标准

GB/T18204.4—2013

代替GB/T18204.2〜18204.8—2000,GB/T18204.11-18204.12—2000,

部分代替GB/T17220—1998

公共场所卫生检验方法

第4部分:公共用品用具微生

Examinationmethodsforpubliplaces—

Part4:Microorganismonasurfaceofpubliarticles

2013-12-31发布2014-12-01实施

GB/T18204.4—2013

目次

前言m

i范围1

2术语和定义1

3细菌总数平皿计数法1

4大肠菌群多管发酵法4

5金黄色葡萄球菌平皿鉴定法6

6真菌总数平皿计数法8

7溶血性链球菌培养法9

附录A（规范性附录）公共场所公共用品用具微生物采样方法11

T

GB/T18204.4—2013

言

GB/T18204《公共场所卫生检验方法》分为六个部分：

——第1部分:物理因素；

——第2部分:化学污染；

——第3部分:空气微生；

——第4部分:公共用品用具微生；

——第5部分:集中空调通风系统；

——第6部分:卫生监测技术规范。

本部分为GB/T18204的第4部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分代替GB/T18204.2—2000«公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定》、GB/T18204.3-

2000《公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定》、GB/T18204.4—2000《公共场所毛巾、床上卧具

微生物检验方法细菌总数测定》、GB/T18204.5—2000«公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法

大肠菌群测定》、GB/T18204.6—2000《理发用具微生物检验方法大肠菌群测定》、GB/T18204.7-

2000《理发用具微生物检验方法金黄色葡萄球菌测定》、GB/T18204.8—2000《公共场所拖鞋微生

检验方法霉菌和酵母菌测定》。代替GB/T18204.11—2000«公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方

法细菌总数测定》、GB/T18204.12—2000*（：公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法大肠菌群测

定》。部分代替GB/T17220—1998《公共场所卫生监测技术规范》中的公共用品用具采样要求。

本部分与GB/T18204.2〜18204.8—2000、GB/T18204.11〜18204.12—2000和GB/T17220—

1998相比，主要变化如下：

——对菌落计数公式进行了修改；

——增加了溶血性链球菌检验方法。

本部分由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本部分由中华人民共和国卫生部负责解释。

本部分负责起草单位:江苏省疾病预防控制中心。

本部分参加起草单位:南京市疾病预防控制中心。

本部分主要起草人：陈连生、沈簣、符哓梅、甄世祺、陈晓东、张秀珍、石利民。

自本部分实施之日起,GB/T18204.2-18204.8—2000,GB/T18204.11〜18204.12—2000全部内

容和GB/T17220—1998中相应内容同时废止。

GB/T18204.2〜18204.8—2000、GB/T18204.11〜18204.12—2000的历次版本发布情况为：

——GB/T18204.2—2000；

——GB/T18204.3；

——GB/T18204.4；

——GB/T18204.5；

——GB/T18204.6；

——GB/T18204.7；

——GB/T18204.8；

——GB/T18204.11—2000；

——GB/T18204.12—2000o

GB/T17220—1998的历次版本发布情况为：

——GB/T17220—19980

m

GB/T18204.4—2013

公共场所卫生检验方法

第4部分：公共用品用具微生

1范围

GB/T18204的本部分规定了公共场所公共用品用具细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄

球菌和溶血性链球菌的采样与测定方法。

本部分适用于公共场所内公共用品用具细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄葡萄球菌以及溶血性

链球菌的测定，其他场所可参照执行。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

细菌总数totalbacterialcount

公共用品用具经过采样处理，在营养琼脂培养基上经35°C-37°C.48h培养所生长发育的嗜中温

性需氧和兼性厌氧菌落的总数。

2.2

大肠菌群coliforms

在37°C、Z4h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽剋杆菌。

2.3

金黄色葡萄球菌staphylocousaureus

在BairdParker培养基或血平板培养基上生长良好，分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性的革兰氏阳

性葡萄状球菌。

2.4

真菌总数totalfungicount

在孟加拉红或沙氏琼脂培养基上经25°C-28°C、3d~7d培养所形成菌落的总数。

2.5

溶血性链球菌streptocoushemolyticus

属于链球菌属，为革兰氏阳性菌，分解葡萄糖，产酸不产气，血平板上产生溶血圈。

3细菌总数平皿计数法

3.1培养基与试剂

3.1.1生理盐水成分：

氯化钠8.5g

蒸憾水1000mL

制法:称取&5g氯化钠溶于1000mL蒸憾水中，分装到试管内，每管10mL,121°C高压灭菌

15min。

1

GB/T18204.4—2013

3.1.2营养琼脂成分：

蛋白腺10g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂10g〜20g

蒸憎水1000mL

制法:将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4〜7.6,分装于玻璃容器内，经103.43kPa

（121°C,15lb）灭菌20min,储存于冷暗处备用。

3.2仪器和设备

3.2.1高压蒸汽灭菌器。

3.2.2干热灭菌箱。

3.2.3恒温培养箱：36°C±1°C。

3.2.4冰箱。

3.2.5电炉或微波炉。

3.2.6天平：感量0.1go

3.2.7涡旋混合器。

3.2.8无菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等。

3.2.9灭菌棉拭子。

3.2.10灭菌剪刀。

3.2.11pH计或精密pH试纸。

3.2.12放大镜或（和）菌落计数器。

3.3检验步骤

3.3.1采样方法见附录A。

3.3.2样品的稀释:将放有采样后棉拭子的试管充分振摇，此液为1:10的样品匀液。用1mL无菌吸

管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL生理盐水稀释液（3.1.1）的无菌

试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均

匀，制成1:100的样品匀液。按同法制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释1次，换用1次1mL无

菌吸管或吸头。

3.3.3样品的接种：根据对样品污染状况的估计，选择1个〜2个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍

递增稀释时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入两

个无菌平皿作空白对照。

3.3.4样品的培养：及时将15mL〜20mL冷却至45°C〜50°C的平板计数琼脂培养基（可放置于

46°C±1°C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。琼脂凝固后，将平板翻转，

36°Ci1°C培养48h+2ho

3.4菌落计数

3.4.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量（CFU）。

3.4.2选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU

的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的

平均