DB22/T 2695-2017 饲料中林可霉素、红霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS65.120

B46

备案号：56308-2017DB22

吉林省地方标准

DB22/T2695—2017

饲料中林可霉素、红霉素的测定

液相色谱-质谱/质谱法

Determinationoflincomycinanderythromycininfeeds-LC-MS/MSmethod

2017-09-30发布2017-11-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2695—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由中国人民共和国吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本标准主要起草人：胡婷婷、赵韫慧、宋清莲、顾婷婷、曹海微、李荣荣。

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DB22/T2695—2017

饲料中林可霉素、红霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了饲料中林可霉素、红霉素液相色谱-质谱/质谱测定方法的原理、试剂或材料、仪器

设备、样品、试验步骤、试验数据处理、精密度及试验报告。

本标准适用于配合饲料、预混饲料及浓缩饲料中林可霉素、红霉素的测定。

本方法饲料中林可霉素、红霉素的检出限0.3μg/kg，定量限为1.0μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

样品中的林可霉素、红霉素用甲醇提取，饱和乙酸铅溶液除蛋白，经N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基

苯固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。

4试剂或材料

除另有规定，仅用分析纯试剂。

4.1水，GB/T6682，一级。

4.2林可霉素标准物质：Lincomycin，C33H50Cl3N5O8S，CAS号：154-21-2。

4.3红霉素标准物质：Erythromycin，C37H67NO13，CAS号：114-07-8。

4.4磷酸二氢钾（KH2PO4）。

4.5三水合乙酸铅（C4H6O4Pb·3H2O）。

4.6甲醇（CH3OH）：色谱级。

4.7乙腈（CH3CN）：色谱级。

4.8盐酸（HCl）。

4.9甲酸（HCOOH）。

4.100.1mol/L盐酸：量取8.2mL盐酸（4.8）至烧杯中，加少量水稀释，将稀释后的溶液转移到1000

mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀。

4.110.1mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH8.0）：称取17.9g磷酸二氢钾（4.4），溶于450mL水中，

用盐酸溶液（4.10）调节pH值至8.0，加水定容至500mL。

4.12饱和乙酸铅溶液：在50mL水中加入一定量的三水合乙酸铅（4.5），超声5min，直至固体不

再溶解。

4.13甲醇溶液（3+7，V/V）：量取30mL甲醇和70mL水，混匀。

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4.140.1%甲酸溶液：量取1mL甲酸（4.9）和999mL水，混匀。

4.15定容液：量取95mL0.1%甲酸溶液（4.14）和5mL乙腈（4.7），混匀备用。

4.16标准储备溶液：分别准确称取林可霉素、红霉素标准品100mg（精确到0.1mg），用甲醇溶解

并定容于100mL棕色容量瓶中，配制成浓度为1000µg/mL的标准储备液，-18℃条件下保存6个月。

4.17混合标准工作液：准确移取一定体积的标准储备溶液（4.16），根据需要用定容液（4.15）稀释

成林可霉素、红霉素混合标准工作液，现用现配。

4.18N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基苯固相萃取柱：200mg/6mL或相当者。使用前依次用5mL甲醇、

5mL水及5mL0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液（4.11）活化。

4.19滤膜：0.22µm，有机系。

5仪器设备

5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2天平：感量为0.01g和0.0001g。

5.3样品粉碎机。

5.4高速离心机：10000r/min。

5.5氮吹仪。

5.6超声波清洗机。

5.7涡旋混合器。

5.8旋转蒸发仪。

6样品

6.1按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样。

6.2按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。

7试验步骤

7.1提取

称取1g（精确至0.01g）饲料样品于50mL具塞离心管中，加入10mL甲醇，充分涡旋混合1min，

超声提取10min，于10000r/min速率下离心5min，收集上清液于鸡心瓶中；残渣中再加入10mL甲醇

重复提取1次，合并两次提取液，于35℃下旋转蒸发至近干后，加入5mL0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液（4.11）

涡旋溶解，将提取液移至玻璃试管中，再用2mL0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液（4.11）充分洗涤鸡心瓶，

合并提取液，在提取液中加入100μL饱和乙酸铅溶液（4.12），涡旋、离心后，取上清液，待净化。如

遇高浓