DB32/T 3775-2020 猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测方法

ICS65.020.20

B31

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3775—2020

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测

方法

RT-LAMPmethodforDetectiongPorcineReproductiveandRespiratory

SyndromeVirus

2020-04-08发布2020-05-15实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3775—2020

目次

前言.....................................................................................................................................................Ⅰ

1范围...........................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.......................................................................................................................................1

3缩略语.......................................................................................................................................................1

4原理...........................................................................................................................................................1

5试剂和仪器设备.......................................................................................................................................2

6操作程序...................................................................................................................................................2

7结果判定...................................................................................................................................................4

8安全和防污染措施...................................................................................................................................4

附录A（规范性附录）试剂的配制.................................................................................................5

附录B（资料性附录）.......................................................................................................................6

I

DB32/T3775—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由南京农业大学提出并归口。

本标准起草单位：南京农业大学。

本标准主要起草人：姜平、张日腾、白娟、熊富强、王先炜、李玉峰、陈闻。

II

DB32/T3775—2020

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测方法

1范围

本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测原理、试剂和仪器设备、检测程序和结果判

定。

本标准适用于猪临床样品（肺脏、脾脏和血清）和细胞培养物中猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测；

同时适用于猪繁殖与呼吸综合征病毒经典型、高致病性、类NADC30型三种基因亚型的分型检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

SN/T1193基因检验实验室技术要求

3缩略语

PRRSV:porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，猪繁殖与呼吸综合征病毒

LAMP：loop-mediatedisothermalamplification,环介导的恒温扩增

RT-LAMP：Reversetranscription,loop-mediatedisothermalamplification，反转录环介导的恒温扩增。

4原理

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）主要引起猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病)。该病毒有美洲

型和欧洲型两个血清型。美洲型又有多个基因亚型。我国流行的美洲型PRRSV主要有传统型、高致病

性和类NADC30型毒株，其主要区别存在于病毒的Nsp2基因。环介导的恒温扩增（LAMP）是一种体

外恒温核酸扩增技术，用于快速检测DNA。RT-LAMP是一种逆转录LAMP，用于检测RNA。本标准

RT-LAMP，根据PRRSV开放阅读框架7（ORF7）基因序列、ORF1a（非结构蛋白Nsp2）基因序列设

计4组引物，建立4种RT-LAMP检测方法（即LAMP1、LAMP2、LAMP3和LAMP4)，其中LAMP1

的特异性引物识别ORF7基因，LAMP2、LAMP3和LAMP4的特异性引物识别Nsp2基因。每种LAMP

引物均包括两对内、外引物（内引物FIP与BIP，外引物F3与B3）和一对环引物（LF与LB）。利用

Bst酶启动循环链置换反应，启动互补链合成，通过在同一链上互补序列周而复始形成有很多环状结构

的茎环DNA混合物，在恒温条件下完成核酸扩增反应。从