YY/T 1455-2016 应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南

ICS11.100

C44

中华人民共和国医药行业标准

/—

YYT14552016

应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值

及其不确定度评定指南

ㅤㅤㅤㅤ

Guidelinesforvaluesassinmentofcatalticactivitconcentrationsofenzmes

gyyy

usinreferencemeasurementroceduresandevaluationofuncertaint

gpy

2016-01-26发布2017-01-01实施

国家食品药品监督管理总局发布

/—

YYT14552016

目次

前言…………………………Ⅰ

1范围………………………1

2规范性引用文件…………………………1

3符号和缩略语……………1

4赋值………………………2

4.1参考测量程序的选择………………2

4.2建立溯源性…………………………2

4.3参考测量程序的评定………………2

4.4实验室内部质量控制………………6

4.5样本测量……………6

5测量不确定度评定………………………6

5.1不确定度的来源分析………………6

5.2测量模型的建立……………………8

5.3标准不确定度的评定………………9

5.4合成标准不确定度的计算…………10

ㅤㅤㅤㅤ

5.5扩展不确定度的确定………………11

6测量结果及其不确定度评定结果的报告………………11

()………

附录A资料性附录酶学参考测量程序信息表12

()…………

附录B资料性附录限值在其他文献或活动中给出的信息13

()……

附录C资料性附录LDH赋值过程及不确定度评定方法举例14

()………………

附录D资料性附录使用灵敏系数进行LDH测量不确定评定举例19

参考文献……………………22

/—

YYT14552016

应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值

及其不确定度评定指南

1范围

本标准规定了应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定的方法。

本标准适用于体外诊断系统的参考测量实验室应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确

定度评定工作。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/标准样品工作则()标准样品定值的一般原则和统计方法

GBT15000.33

/体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质中酶催化浓度赋值的

YYT0638

计量学溯源性

/—临床生物化学检验常规项目分析质量指标

WST4032012

ㅤㅤㅤㅤ

3符号和缩略语

3.1符号

下列符号适用于本文件。

:。

U扩展不确定度

:。

Urel相对扩展不确定度

:。

u,合成不确定度

crel

;:。

αα预先选择的调整值

12

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

:()

ALP碱性磷酸酶AlkalinePhoshatase

p

:()

ALT丙氨酸氨基转移酶AlanineAminotransferase

:()

AMY淀粉酶α-amlase

y

:()

AST天门冬氨酸氨基转移酶AsartateAminotransferase

p

:()

BIPM国际计量局BureauInternationaldesPoidsetMesures

:()

CK肌酸激酶CreatineKinase

CNAS:中国合格评定国家认可委员会(ChinaNationalAccreditationServiceforConformit

y

)

Assessment

:()

CRM有证参考物质CertifiedReferenceMaterial

:()

CV变异系数CoefficientofVariance

1

/—

YYT14552016

:谷氨酰基转移酶()

GGTγ-γ-Glutamltransferase

y

:(

IFCC国际临床化学和检验医学联合会InternationalFederationofClinicalChemistrandLabo-

y

)

ratorMedicine

y

:()

ILAC国际实验室认可合作组织InternationalLaboratorAccreditationCooeration

yp

:()

JCTLM国际检验医学溯源联合会JointCommitteeforTraceabilitinLaboratorMedicine

yy

:()

LDH乳酸脱氢酶LactateDehdroenase

yg

:(

RELA检验医学参考实验室室间质量评价ExternalQualitAssessmentforReferenceLaborato-

y

riesinLaboratorMedicine

y

:()()

标准偏差ion

SDStandardDeviat

4赋值

4.1参考测量程序的选择

4.1.1概述

、、。

人血清中酶催化活性浓度测定是临床诊断治疗监测的重要医学指标酶学测量是临床化学中测

,。

量频率很高的项目其标准化工作尤为重要目前IFCC颁布的37℃时酶学测量的参考方法主要有

、、、、、、。(、、)

ALTASTALPAMYGGTCKLDH七个项目年由BIPMIFCCILAC组成开

2002JCTLM

(),

始运行参考测量程序实验室之间的质量评价RELA活动为酶学测量的标准化起到了重要的推动

作用。

4.1.2参考测量程序的选择

ㅤㅤㅤㅤ

:()、

酶催化活性浓度测量的参考测量程序主要包括JCTLM网站列表的参考测量程序见附录A相

、。

关国家标准行业标准中规定的参考测量程序

4.2建立溯源性

酶学测量中,。,

IFCC出版了一系列的一级参考测量程序使用这一系列参考测量程序时SI单位定

“(-1-3)”,“米(-3)”,

义为摩尔每秒立方米molsm国际计量局将其命名为卡特每立方katalm是溯源等

,//,-33/4/。

级的最高级通常以或表示作为酶学测量的测

μkatLUL1katalm=10katL=6×10UL

μ

,。,

量标准其催化活性浓度的测量按照时参考测量程序进行运行参考测量程序时试剂配

37℃IFCC

,、、

制及每一步骤的测量均应严格按照IFCC程序详细规定进行其中涉及的温度质量体积均溯源至我

国法定计量单位。

、,:

为了建立证明活性浓度测量的溯源性对参考测量程序中规定的以下步骤应进行严格控制

):();

a称量使用计量合格的万分之一天平或十万分之一进行所有称量

),;

b溶液配制过程中所涉及化学试剂的称量全部按照试剂纯度换算后称进行称量

)测量过程中的温度控制使用计量合格的高精度温度测量仪进行监测;

c

d)所使用的分光光度计应定期检定和期间核查;

)溶液配制用容量瓶和量筒应使用称重法进行确认;

e

)结果处理使用合理有效的统计学方法。

f

具体溯源性建立过程参见/0638的规定。

YYT

4.3参考测量程序的评定

4.3.1概述

,

4.3.1.1实验室运行参考测量程序时应使用CRM验证程序的正确度使用特性值稳定的质量控制物

2

/—

YYT14552016

,,

质验证程序的精密度即测量结果的或和偏倚应落在实验室预定的限度内该限度通常有多种

SDCV

来源。

,

4.3.1.2使用正确度验证物质进行测量过程的评定时其测量结果的平均值应落在正确度验证物质规

,()。

定的限度内精密度重复性应落在实验室预定的限度内

正确度验证物质宜选用国家或国际相关权威机构提供用于正确度验证的物质、提供的用于

IFCC

参考测量实验室室间质量评价的物质等。

4.3.1.3关于预定的限度的确认通常考虑以下几点:

),;

a认可方案的限度如从CRM定值报告中获得

),;

b程序使用者或组织者给出的限度如从正确度验证物质提供者获得

),

c经验的限度程序使用者根据先前测量过程中获得的值制定预定的限度或依据多家实验室测

量结果的中位值制定预定的限度;

),:

d采用标准文件给定的限度如CNAS-CL33文件规定IFCC参考方法对酶学参考物质的测量

结果应在统计学达到无差异。

4.3.2CRM的选择

,,、

使用者在选择CRM时应考虑参考测量程序和CRM的特性同时应考虑CRM定值方法预期用

途及CRM证书上关于该CRM的详细使用说明。

)溯源性:,;

aCRM的特性值应有计量溯源性并附有合理有效的测量不确定度

)水平:的标示值应在参考测量程序的测量范围内;

bCRM

)基质:的基质尽可能接近人血清基质;

cCRM

)分析物:的分析物应与参考测量程序相同或是参考测量程序分析物的同工酶;

dCRM

)最小取样量:ㅤㅤㅤㅤ;

eCRM规定的最小取样量应小于参考测量程序规定用量

)数量:的量应满足整个实验用量;

fCRM

)稳定性:的稳定性应满足参考测量程序相关要求。

gCRM

4.3.3参考测量程序测量精密度评定

4.3.3.1概述

,()。

精密度的评定是将重复性条件或其他规定条件下实验室内或与预定的限度进行比较

SDCV

重复测量次数的选择

4.3.3.2n

重复测量的次数主要取决于和的值以及评定精密度所选择的假设条件。

nαβ

、,

通常假设在自由度时的临界值与和比率的关系作为判定标准表

ν=n-1α=0.05=0.01σσ

βwwo

给出了不同自由度下、,。

1α=0.05=0.01时测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的判定临界值

β

推荐的测量次数不少于次。

10

、,

表1不同自由度下α=0.05=0.01时测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比

β

ν123456789

α=0.05

159.317.36.255.654.473.803.373.072.85

β=0.01

ν1012152024304060120

α=0.05

2.672.432.191.951.831.711.591.451.30

β=0.01

3

/—

YYT14552016

4.3.3.3评定方法

,,

在重复性条件或其他规定的条件下重复测量至少次用法或其他适用统计方法进行

10Grubbs

()、():

异常值取舍后分别按式式计算平均值和标准偏差估计值

12xs

w

n

xi

…………()

x=∑1

n

i=1

1

n2

()2

éxxù

-

êiú…………()

s=2

wê∑n1ú

ëi=1-û

式中:

xi———单个测量结果;

n———剔除离群值之后测量结果的数目。

():

按式计算比值

3

2

æsö

χ2çw÷…………()

=3

c

èσø

wo

式中:

2

χc———测量过程标准偏差和所要求标准偏差之比的平方;

σ———实验室内标准偏差预定的限值;

wo

:,,。

注Grubbs法或其他适用统计方法检查时最多只能删除一个离群值如取舍过多则表明测量过程存在问题此

,。

时应重新进行相关测量

4.3.3.4结果判定

22ㅤㅤㅤㅤ

χχ———表明测量过程达到所要求的精密度;

≤table

22

χχ———表明测量过程达不到所要求的精密度。

>table

:(),,

注当实验室内标准偏差变异系数预定的限值是实验室通过有限的测量次数获得时通常情况下将测量过程标

()(),。

准偏差变异系数和所要求标准偏差变异系数直接进行比较判定结果表给出的推荐实验室内标准偏

2

(),,,

差变异系数预定的限值为有限的测量次数获得的限值因此当使用表的限值进行结果判定时应将测量

2

()()。

过程标准偏差变异系数和所要求标准偏差变异系数直接进行比较

()

表2实验室内标准偏差变异系数预定的限值

分析物GGTLDHALTCKAMYASTALP

浓度区间/(/)

UL≤40≤120≤40≤125≤100≤40≤100

/(/)

SDUL≤0.8≤5.0≤0.8≤2.5≤2.0≤0.8≤2.0

浓度区间/(/)

UL>40>120>40>125>100>40>100

/

CV%≤2.0≤2.0≤2.0≤2.0≤2.0≤2.0≤2.0

4.3.4参考测量程序测量正确度评定

4.3.4.1概述

,。

正确度的评定是将测量结果的平均值与CRM标示值或正确度验证物质允许的限度进行比较

,,

测量结果的平均值与CRM标示值进行比较时应考虑测量程序精密度的各实验室之间的分量不应把

。

CRM的不确定度简单的当做偏倚的允许限值使用参考测量程序的测量结果不应使用修正因子进行

修正。

4

/—

YYT14552016

4.3.4.2评定方法

,,

通常情况下对所选用物质进行至少次测量计算平均值和正确度评定物质标示值的差值或比

3x

较平均值和正确度评定物质标示范围的关系。

x

4.3.4.3结果判定

(),

测量结果的或应符合表的要求测量结果平均值和正确度评定物质标示值的偏差应

SDCV2x

符合表的要求或应在正确度评定物质的标示范围范围内。

3

,,:

使用CRM进行评定时有两个因素直接影响测量结果的判定分别为

)标示值的不确定度;

aCRM

),。

b待评定测量过程的测量不确定度表示为σ

D

/,

对于严格按照GBT15000.3制备的CRM标示值的不确定度与测量过程的标准偏差σ相比应是

D

,()。

很小的这种情况下用式作为可接受的准则

4

…………()

α2σxα2σ4

--≤-≤-+

2Dμ1D

,

式中和是根据实际情况或技术的限制或规定由实验室事先选择的调整值为保证测量结果的

αα

12

,。。

可靠性通常情况下选择表给出了运行参考测量程序时几种酶测量结果可接受的限值

α=α=03

12

,。

如果和有特殊要求应有充分的证据证明

αα

12

,,

在测量过程中不可能完全控制影响测量结果的因素因此在每次测量中都存在随机误差在正确度

。:

评定时应予以考虑测量结果的随机波动分为两个部分

),,。

实验室内或短期波动标准偏差为是的估计值

aσsσ

www

),。ㅤㅤㅤㅤ,。

b实验室间波动标准偏差为σ如果实验仅在一个实验室内进行时σ不能直接被确定

LMLM

,;

在大多数情况下可以用在中间精密度条件下得到的标准偏差代替或使用证书

σσCRM

1LM

,。

或其他来源如适当的国际标准提供的σ代替σ

LLM

因此,2值的计算见式():

σ5

D

2

s

22w…………()

σσ5

=+

DLM

n

,,(),()。

在实际测量中与相比很小因此当重复次数时在式中可以等于或

sσ≥105σσσ

wLMDLML

,()():

于是式可简化为式

46

…………()

α2σxα2σ6

--≤-≤-+

2LMμ1LM

表3运行参考测量程序时几种酶测量结果偏倚可接受的限值

分析物GGTLDHALTCKAMYASTALP

浓度区间/(/)

UL≤40≤120≤40≤125≤100≤40≤100

绝对偏差/(/)

UL±1.7±4.0±1.3±5.0±3.3±2.4±4.0

浓度区间/(/)

UL>40>120>40>125>100>40>100

相对偏差±4.2%±3.3%±3.3%±4.0%±3.3%±5.8%±4.0%

:,;

注所使用标准物质的不确定度小于该限值时以该限值作为判定依据所使用标准物质的不确定度大于该限

1

,。

值时以不确定度作为判定依据

:。

注关于限值在其他文献或活动中给出的信息见附录

2B

5

/—

YYT14552016

4.4实验室内部质量控制

4.4.1概述

、,。

实验室应使用稳定均匀的高低水平的质量控制物质进行参考测量程序的质量控制在每次实验

,。

时均应进行质量控制物质的测量如有必要应建立相应的质量控制图

4.4.2质量控制物质的选择

,,

由于参考测量程序的特殊性对质量控制物质有一定的特殊要求实验室应选择适宜的质量控制物

,:

质可以选择以下几种来源的物质

)样品;

aRELA

b)商品质量控制物质;

)混合人血清等。

c

、。

质量控制物质的均匀性特性值浓度水平和稳定性应能满足预期要求

/

4.4.3质量控制物质的复溶融化

/,。

实验室应制定样本复溶融化的标准操作规程保证每次试验样本处理的一致性

4.4.4质量控制物质范围

实验室应建立本实验室的质控合格范围。

4.4.5质量控制物质结果

实验室应预先制定预期的(),ㅤㅤㅤㅤ,

或限值当质量控制物质测量精密度满足规定要求时计算测