DB13/T 1778-2013 鱼类链球菌病诊断技术规范

ICS67.120.30

B50

DB13

河北省地方标准

DB13/T1778—2013

鱼类链球菌病诊断技术规范

Thenormofdiagnosistechniqueforstreptococcicosisinfish

2013-09-05发布2013-09-30实施

河北省质量技术监督局发布

DB13/T1778—2013

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河北省质量技术监督局提出。

本标准起草单位：河北省水产养殖病害防治监测总站。

本标准主要起草人：侯金良、张志华、马瑞欣、李同庆、孙伟彬、邵铁凡、梁艳红、田洋、苏欢欢、

薛政。

I

DB13/T1778—2013

鱼类链球菌病诊断技术规范

1范围

本标准规定了鱼类链球菌病的诊断方法。

本标准适用于鱼类链球菌病病原菌的鉴定及本病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

病原菌

链球菌（Streptococcus）呈球形或卵圆形，在液体培养基中以成对或链状出现；革兰氏阳性、触

媒阴性、兼性厌氧；在血平板上通常溶血。引起鱼类链球菌病的有海豚链球菌（Streptococcusiniae）、

无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）、米氏链球菌（Streptococcusmillieri）、副乳房链球菌

（Streptococcusparauberis）和停乳链球菌（Streptococcusdysgalactiae）。其中海豚链球菌和无

乳链球菌是引起鱼类链球菌病的主要病原菌。

4设备和材料

设备和材料包括：

a)恒温培养箱。

b)显微镜：10×～100×。

c)灭菌乳钵。

d)天平：精度0.1g。

e)恒温水浴锅。

f)带有热盖功能的PCR仪。

g)电泳仪。

h)紫外分析仪或紫外观察灯。

i)灭菌剪刀、镊子。

j)高压灭菌器。

1

DB13/T1778—2013

5培养基和试剂

培养基和试剂包括：

a)水：应符合GB/T6682的要求。

b)Todd-Hewitt肉汤（简称THB)。

c)血琼脂平板：按GB/T4789.28中规定。

d)75％酒精。

e)革兰氏染色液：按GB/T4789.28中规定。

f)3％H2O2溶液（临时配制）。

g)TaqDNA聚合酶。

h)酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）。

i)琼脂糖。

j)溴化乙锭（EB）。

k)标准菌株：海豚链球菌和无乳链球菌标准菌株。

l)dNTP：含dATP、dCTP、dGTP和dTTP各10mmol/L。

m)PCR引物：

本标准以链球菌延伸因子（EF-Tu）tuf基因设计一对引物。扩增片段大小为639bp。使用时浓度

为10μmol/L。其序列如下：

E1:5′－GGACCAATGCCACAAACTCG－3′

E2:5′－TGGAGTATGACGTCCACCTTC－3′

n)DNA分子质量标准（Marker）。

o)无水乙醇：使用前预冷至-20℃。

6诊断步骤

6.1活动情况观察

患病鱼游动缓慢，缺乏活力，分散于缓流处，浮于水面，或头向上尾向下呈悬垂状；临死前，病鱼

或间断地狂游、翻滚、转圈。

6.2外部检查

患病鱼单侧或双侧眼球突出、充血，角膜混浊；体色发黑，肛门红肿；鳃贫血，鳃盖下缘、胸鳍基

部有出血现象；体表有l处或多处隆起，尤以尾部为多见，隆起部位出血或溃疡。

6.3解剖检查

患病鱼脑部充血，有出血点；肝脏肿大、出血，或脂肪变性、褪色；脾脏肿大，呈暗红色；胆囊、

肾脏肿胀；胃肠或腹腔积水，肠壁充血发炎。

6.4病原菌的实验室