GBZ/T(卫生) 254-2014 尿中苯巯基尿酸的高效液相色谱测定方法

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT2542014

尿中苯巯基尿酸的高效液相色谱测定方法

DeterminationofS-henlmercaturicacidinurinebhiherformance

pypygp

liuidchromatorh

qㅤㅤㅤㅤgpy

2014-07-23发布2014-12-15实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

/—

GBZT2542014

尿中苯巯基尿酸的高效液相色谱测定方法

1范围

本标准规定了尿中苯巯基尿酸浓度的检测方法。

本标准适用于职业接触苯作业工人尿中苯巯基尿酸浓度的测定。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生生物监测质量保证规范

GBZT173

/:

生物材料中化学物质的测定方法第部分生物材料中化学物质的测定方法

GBZT210.55

/尿中肌酐分光光度测定方法

WST97

3尿中苯巯基尿酸的高效液相色谱法

ㅤㅤㅤㅤ

3.1原理

(,),(

尿中苯巯基尿酸S-henlmercaturicacidSPMA经萃取后经十八烷基硅烷键合硅胶柱Octa-

pyp

,),,,。

declsillODS柱分离紫外检测器检测以SPMA峰保留时间定性峰高或峰面积定量

yy

3.2仪器

,测器。

3.2.1高效液相色谱仪紫外检

仪器操作参考条件:

)色谱柱:(,);

aODS150mm×4.6mm5m

μ

)保护柱:(,);

bODS10mm×4.6mm5m

μ

)::;:,,(

流动相相乙腈相乙腈甲醇用三乙胺水溶液用磷酸调

cAB100mL24mL0.5%pH=

);:,

定容至梯度洗脱用相用相︰相

2.161000mL0min~34min100%B34min~41minAB

(),;:/;

︰用相流速

109041min~49min100%B2.0mLmin

)柱温:;

d35℃

)进样量:;

e20L

μ

)检测波长:。

f205nm

3.2.2分光光度计。

聚氯乙烯塑料瓶:。

3.2.3100mL

离心机://。

3.2.40rmin~5000rmin

具塞离心管:、。

3.2.510mL15mL

微量注射器:。

3.2.625L

μ

1

/—

GBZT2542014

3.3试剂

()。

3.3.1肌酐测定试剂盒苦味酸分光光度法

,。

3.3.2水双蒸水

,。

3.3.3磷酸分析纯

,。

3.3.4乙腈色谱纯

,。

3.3.5甲醇色谱纯

,。

3.3.6盐酸分析纯

,()。

3.3.7硫酸溶液50%体积分数

(),/。

3.3.8氢氧化钾分析纯溶液7.8molL

,()。

萃取液氯仿︰异丙醇︰体积比

3.3.9=51

3.3.10氮气()。

≥95%

:,,

3.3.11标准溶液精密称取40mSPMA标准品置于100mL容量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度

g

,/,,,

充分摇匀此溶液为400mLSPMA贮备液于4℃保存备用可保存期限30d临用前用甲醇稀释到

g

;。

所需浓度的标准溶液或用国家认可的标准溶液配制

、

3.4样品的采集运输和保存

,;

用聚乙烯塑料瓶收集接触苯作业的工人班后尿按︰的体积比例加入盐酸另留取

50mL1001

。,。,

5mL不加酸尿置于试管用作尿中肌酐测定尿样采集后最好在48h内检测若需保存尿样在4℃

,。

条件下可保存周在冰箱冷冻可保存个月

2-20℃4

ㅤㅤㅤㅤ

3.5分析步骤

按/尽快测定尿中肌酐浓度。

3.5.1WST97

:,,

3.5.2样品处理分析时将尿样从冰箱取出于室温下解冻取约5.0mL尿样于10mL具塞离心管中

/,,,,

离心取上清液于具塞离心管中加入水涡旋约加

5000rmin15min2.0mL15mL2.0mL15s

,,,,,

0.8mL硫酸溶液涡旋约30s10min内加入0.8mL氢氧化钾溶液涡旋约30s加入5.0mL萃取液

,,/,,,

盖紧磨口盖在涡旋混合器上涡旋约50s4000rmin离心10min分层清晰后保留有机相将上层水

,,,

相转移至另一15mL离心管中再加入5.0mL萃取液进行第二次萃取合并两次萃取液水浴50℃氮

,,/,。

气流下挥干残渣用甲醇涡旋溶解离心取甲醇上清液进样测定

100L5000rmin10min20L

μμ

://。

3.5.3标准曲线绘制用甲醇稀释标准溶液成0.0L~1000L苯巯基尿酸标准系列参照仪器

μgμg

,,,。。

操作条件将液相色谱仪调节至最佳测定状态进样测定各标准系列每个浓度重复测定次

20L3

μ

由测得的峰高或峰面积均值对相应的苯巯基尿酸浓度(/)绘制标准曲线或计算回归方程。

μgL

:,

3.5.4样品测定用测定标准系列的操作条件测定处理好的样品和空白对照溶液测得样品的峰高或

,(/)。

峰面积值减去空白对照的峰高或峰面积值后由标准曲线得苯巯基尿酸的浓度μgL

3.6计算

():

按式计算尿中苯巯基尿酸的校正浓度

1

c

1

c…………()

=1

c

2

式中:

———,(/);

c尿中苯巯基尿酸浓度单位为微克每克肌酐μgg

2

/—

GBZT2542014

———,(/);

c测得的尿样中苯巯基尿酸浓度单位为微克每升gL

1μ

———(),(/)。

c尿中肌酐Cr浓度单位为克每升gL

2

3.7说明

/,,/。

3.7.1本法按照GBZT210.5的要求进行研制方法指标符合要求最低检出浓度为40L

μg

(),()

3.7.2本法批内精密度相对标准偏差为2.44%~9.58%批间精密度相对标准偏差为3.75%~

9.23%,加标回收率为92.64%~103.66%。

,,。

样品前处理调节尿样时的提取回收率较高

3.7.3pH<2SPMA

3.7.4SPMA保留时间为31min左右。

检测过程中的质量控制按照/执行。

3.7.5GBZT173

尿中苯巯基尿酸的高效液相色谱质谱法

4-

4.1原理

(,),,

尿中苯巯基尿酸经液液萃取后经柱分离质谱检测器

S-henlmercaturicacidSPMA-ODS

pyp

,,。

检测以SPMA分子离子峰的保留时间定性峰高或峰面积定量

4.2仪器

4.2.1分光光度计。

4.2.2聚氯乙烯塑料瓶:。ㅤㅤㅤㅤ

100mL

4.2.3离心机://。

0rmin~10000rmin

4.2.4具塞离心管:,。

10mL15mL

高效液相色谱质谱仪。

4.2.5-

仪器操作参考条件:

)色谱柱:(,);

aODS150mm×2.0mm4.6m

μ

)保护柱:(,);

bODS50mm×2.0mm4.6m

μ

):;

流动相乙腈︰甲酸︰

c0.3%=2575

)流量:/;

d0.2mLmin

)柱温:;

e35℃

):;

f离子源为电喷雾离子源负电模式

)接口电压:;

g4.5kV

)脱溶剂管电压:;

h-15V

)模块加热器温度:;

i200℃

)脱溶剂管温度:;

j230℃

)雾化气流:/;

k1.5Lmin

)():/。

l定量测定时采用选择离子监控SIR模式mz238

4.3试剂

();

4.3.1肌酐测定试剂盒苦味酸分光光度法

,。

4.3.2水双蒸水

3

/—

GBZT2542014

,。

4.3.3乙腈色谱纯

,。

4.3.4甲醇色谱纯

,。

4.3.5盐酸分析纯

(),()。

4.3.6硫酸分析纯溶液50%体积分数

(),/。

4.3.7氢氧化钾分析纯溶液7.8molL

,()。

萃取液氯仿︰异丙醇︰体积比

4.3.8=51

氮气()。

4.3.9≥95%

:,,

4.3.10标准溶液精密称取40mSPMA标准品置于100mL容量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度

g

,/,,,

充分摇匀此溶液为400mLSPMA贮备液于4℃保存备用可保存期限30d临用前用甲醇稀释到

g

;。

所需浓度的标准溶液或用国家认可的标准溶液配制

、

4.4样品的采集运输和保存

,;

用聚乙烯塑料瓶收集接触苯作业的工人班后尿按︰的体积比例加入盐酸另留取

50mL1001

。,。,

5mL不加酸尿置于试管用作尿中肌酐测定尿样采集后最好在48h内检测若需保存尿样在4℃

,。

条件下可保存周在冰箱冷冻可保存个月

2-20℃4

4.5分析步骤

4.5.按/尽快测定尿中肌酐浓度。

1WST97

:,,

4.5.2样品处理分析时将尿样从冰箱取出于室温下解冻取约5.0mL尿样于10mL具塞离心管中

/,,,,

离心取上清液于具塞离心管中加入水涡旋约加

5000rmin15min2.0mL15mL2.0mL15s

ㅤㅤㅤㅤ

,,,,,

0.8mL硫酸溶液涡旋约30s10min内加入0.8mL氢氧化钾溶液涡旋约30s加入5.0mL萃取液

,,/,,,

盖紧磨口盖在涡旋混合器上涡旋约50s4000rmin离心10min分层清晰后保留有机相将上层水

,,,

相转移至另一离心管中再加入萃取液进行第次萃取合并两次萃取液水浴氮

15mL5.0mL250℃

,,/,。

气流下挥干残渣用100L甲醇涡旋溶解5000rmin离心10min取5L甲醇上清液进样测定

μμ

://。

4.5.3标准曲线绘制用甲醇稀释标准溶液成0.0L~320.0L苯巯基尿酸标准系列参照仪器

μgμg

,,,。

操作条件将高效液相色谱质谱仪调节至最佳测定状态进样测定各标准系列每个浓度重复

-5mL

。(/)

测定次由测得的峰高或峰面积均值对相应的苯巯基尿酸浓度绘制标准曲线或计算回归

3μgL

方程。

:,

4.5.4样品测定用测定标准系列的操作条件测定上述处理好的样品和空白对照溶液测得样品的峰

,(/)。

高或峰面积值减去空白对照的峰高或峰面积值后由标准曲线得苯巯基尿酸的浓度μgL

4.6计算

():

按式计算尿中苯巯基尿酸的校正浓度

2

c

1

…………()

c=2

c

2

式中:

———,(/);

c尿中苯巯基尿酸浓度单位为微克每克肌酐μgg

———,(/);

c测得的尿样中苯巯基尿酸浓度单位为微克每升gL

1μ

———(),(/)。

c尿中肌酐Cr浓度单位为克每升gL

2

4.7说明

/,/;/,

4.7.1在信噪比SN>10时本法的最低检测浓度为10L在信噪比SN=3时最低检出浓度为

μg

4

/—

GBZT2542014

5/。

μgL

(),()

4.7.2本法批内精密度相对标准偏差为1.97%~7.96%批间精密度相对标准偏差为2.72%~

8.57%。加标回收率为93.86%~104.33%。

,,。

4.7.3样品前处理调节尿样时的提取回收率较高

pH<2SPMA

,,。

4.7.4使用0.3%甲酸流动相SPMA色谱峰出峰时间短且附近没有杂质峰的干扰

,,。

以分子离子峰的保留时间定性本实验条件下的保留时间为左右

4.7.5SPMASPMA7.8min

,。

在接触低浓度苯时使用高效液相色谱质谱法检测尿中

4.7.6-SPMA

ㅤㅤㅤㅤ

5