GB/T 21311-2007 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法

ICS67.120

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T21311—2007

动物源性食品中硝基咲喃类药物代谢物

残留量检测方

高效液相色谱/串联质谱

Determinationofresiduesofnitrofuranmetabolitesinfoodstuffsof

animalorigin—HPLC-MS/MSmethod

2007-10-29发布2008-04-01实施

发布

GB/T21311—2007

刖

本标准的附录A、附录E、附录C均为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本标准主要起草人:彭涛、李晓娟、国伟、孙利、林黎明、于静、邱月明、储晓刚、唐英章。

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GB/T21311—2007

动物源性食品中硝基咲喃类药物代谢物

残留量检测方

高效液相色谱/串联质谱

1范围

本标准规定了动物源性食品中硝基咲喃类药物代谢物3-氨基-2-恶瞠酮(3-amino-2-oxalidinone,

AOZ、5-吗咻甲基-3-氨基-2-恶哩烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinone,AMOZ、1-氨

基乙内酰聯(1aminohydantoin,AHD和氨基月尿(semicarbazide,SEM残留量的高效液相色谱/串联

质谱测定方。

本标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中硝基咲喃类药物代谢物3-氨基-2-恶睦酮、

5-吗咻甲基-3-氨基-2-恶瞠烷基酮、1-氨基-乙内酰豚和氨基麻残留量的定性确证和定量测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方(GB/T6682—1992,neqISO3696：1987)

3原理

样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衍生，调pH值7.4后，用乙酸乙酯提取，正己烷净化。分析物

采用高效液相色谱/串联质谱定性检测，采用稳定同位素内标法进行定量测定。

4试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:高效液相色谱级。

4.2乙睛：高效液相色谱级。

4.3乙酸乙酯：高效液相色谱级。

4.4正己烷：高效液相色谱级。

4.5浓盐酸。

4.6氢氧化钠。

4.7甲酸:高效液相色谱级。

4.8邻硝基苯甲醛。

4.9三水磷酸钾。

4.10乙酸钱。

4.110.2mol/L盐酸溶液：准确量取17mL浓盐酸(4.5),用水定容至1L。

4.122.0mol/L氢氧化钠溶液：准确称取80g氢氧化钠(4.6),用水溶解并定容至1L。

4.130.1mol/L邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5g邻硝基苯甲醛(4.8),用甲醇溶解并定容至

100mLo

4.140.3mol/L磷酸钾溶液：准确称取79.893g三水磷酸钾(4.9),用水溶解并定容至1L。

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GB/T21311—2007

4.15乙月青饱和的正己烷：量取正己烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙睛后，剧烈振摇，待分

配平衡后，弃去乙月青层即得。

4.160.1%甲酸水溶液(含0.0005mol/L乙酸钱)：准确量取1mL甲酸(4.7)和称取0.0386g乙酸

钱(4.10)于1L容量瓶中，用水定容至1Lo

4.17标准物质：3-氨基-2-恶瞠酮、5-吗咻甲基-3-氨基-2-恶醴烷基酮、1-氨基-乙内酰脉、氨基

豚，纯度豪99%。

4.18内标物质：3-氨基-2-恶瞠酮的内标物，D』-A()Z；5-吗咻甲基-3-氨基-2-恶卩坐烷基酮的内标物，

D5-AM()Z；1-M基-乙内酰豚的内标物严C-AHD；氨基服的内标物,I:1C15N-SEM,纯度$99%。

4.19标准储备液：分别准确称取适量标准品(精确至0.0001g),用乙睛溶解，配制成浓度为

100mg/L的标准储备溶液，一18C冷冻避光保存，有效期3个月。

4.20混合中间标准溶液：准确移取标准储备液(4.19)各1mL于100mL容量瓶中，用乙睛定容至刻

度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液,4"C冷藏避光保存，有效期1个月。

4.21混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合中间标准溶液(4.20)于10mL容量瓶中，用乙月青定容

至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液,4"C冷藏避光保存，有效期1周。

4.22内标储备液：准确称取适量内标物质(精确至0.0001g),用乙月青溶解，配制成浓度为100mg/L

的标准储备溶液，一1&C冷冻避光保存，有效期3个月。

4.23中间内标标准溶液：准确移取1mL内标储备液(4.22于100mL容量瓶中，用乙睛定容至刻度，

配制成浓度为1mg/L的中间内标标准溶液,4C冷藏避光保存，有效期1个月。

4.24混合内标标准溶液：准确移取中间内标标准溶液(4.23各0.1mL于10mL容量瓶中，用乙睛定

容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合内标标准溶液,4"C冷藏避光保存，有效期1周。

4.25微孔滤膜：0.20“m,有机相。

4.26氮气：纯度$99.999%。

4.27氮气：纯度$99.999%。

5仪器和设备

5.1液相色谱/串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI0

5.2组织捣碎机。

5.3分析天平：感量0.0001g,0.01go

5.4均质器：10000r/min0

5.5振荡器。

5.6恒温箱。

5.7pH计:测量精度士0.02pH单位。

5.8离心机：10000r/min0

5.9氮吹仪。

5.10旋涡混合器。

5.11容量瓶：1L,100mL,10mL。

5.12具塞塑料离心管：50mLo

5.13刻度试管：10mL0

5.14移液枪：5mL,lmL,100卩L。

6试样制备与保存

6.1肌肉、内脏、鱼和虾

从原始样品取出有代表性样品约500g,用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容

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GB/T21311—2007

器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18C冷冻避光保存。

6.2肠衣

从原始样品取出有代表性样品约100g,用剪刀剪成边长＜5mm的方块，混匀后均分成两份，分别

装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18"C冷冻避光保存。

6.3蛋

从原始样品取出有代表性样品约500g,去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装入

洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4C冷藏避光保存。

6.4奶和蜂蜜

从原始样品取出有代表性样品约500g,用组织捣碎机充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作

为试样，密封，并标明标记。将试样置于4C冷藏避光保存。

注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化。

7样品处理

7.1水解和衍生化

7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣

称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液（1+1,体积

比），振荡10min后，以4000r/min离心5min,弃去液体。残留物中加入10mL0.2mol/L盐酸，用均

质器以10000r/min均质1min后，再依次加入混合内标标准溶液（4.24）100卩L,邻硝基苯甲醛溶液

（4.13）100卩L,涡动混合30s后，再振荡30min,置37C恒温箱中过夜（16h）反应。

7.1.2蛋、奶和蜂蜜

称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入10mL〜20mL0.2mol/L盐酸（以

样品完全浸润为准），用均质器以10000r/min均质1min后，再依次加入混合内标标准溶液（4.24）

100/丄，邻硝基苯甲醛溶液（4.13）100/丄.涡动混合30s后，再振荡30min,置37C恒温箱中过夜

（16h）反应。

7.2提取和净化

取出样品，冷却至室温，加入1mL〜2mL0.3mol/L磷酸钾（1mL盐酸溶液加0.1mL磷酸钾溶

液），用2.0mol/L氢氧化钠调pH7.4（+0.2）后，再加入10mL〜20mL乙酸乙酯（乙酸乙酯加入体积

与盐酸溶液体积一致），振荡提取10min后，以10000r/min离心10min,收集乙酸乙酯层。残留物用

10mL〜20mL乙酸乙酯再提取一次，合并乙酸乙酯层。收集液在40°C下用N2吹干，残渣用1mL

0.1%甲酸水溶液（4.16）溶解，再用3mL乙睛饱和的正己烷（4.15）分两次液液分酝，去除脂肪。下层

水相过0.20“ni微孔滤膜后，取10卩L供仪器测定。

7.3混合基质标准溶液的制备

7.3.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣

称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入10mL甲醇-水混合溶液

（1+1,体积比），振荡10min后，以4000r/min离心5min,弃去液体。残留物中加入10mL

0.2mol/L盐酸，用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度：1、5、10、50、100ng/mL,

分别加入混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作溶液（4.21）,再加入混合内标标准溶液（4.24）

100/L,余下操作同7.1.1和7.2。

7.3.2蛋、奶和蜂蜜

称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入10mL〜20mL

0.2mol/L盐酸（以样品完全浸润为准），用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度：

1、5、10、50、100ng/mL,分别加入混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作溶液（4.21）,再加入混合内

标标准溶液（4.24）100卩L,余下操作同7.1.2和7.2。

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GB/T21311—2007

8测定

&1液相色谱条件

a）色谱柱:XTerraMSC18,150mmX2.1mm（内径）,3.5卩m,或相当者;

b）柱温：3（TC；

c）流速：0.2mL/min；

d）进样量：10卩1＞；

e）流动相及洗脱条件见表lo

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min流动相A（乙睛）流动相B(4.16)

010%90%

7.0090%10%

10.0090%10%

10.0110%90%

20.0010%90%

8.2串联质谱条件

参见附录A。

8.3液相色谱/串联质谱测定

8.3.1定性测定

按照上述条件测定样品和混合基质标准溶液，如果样品的质量色谱峰保留吋间与混合基质标准溶

液一致；定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过

表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。混合基质标准溶液的液相色谱/串联质谱色谱图参见

图B.l0

表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度>50%>20%〜5()%>10%〜20%<10%

允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%

8.3.2定量测定

按照内标法进行定量计算。

8.4平行试验

按照以上步骤对同一试样进行平行试验测定。

8.5空白试验

除不称取试样外，均按照以上步骤进行。

9结果计算

按式（1）进行计算：

y=RXcXV

RsXm

式中：

X——试样中分析物的含量，单位为微克每千克（Mg/kg）;

R——样液中的分析物与内标物峰面积比值；

C混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每