GB/T 28984-2012 香蕉苞片花叶病毒检疫鉴定方法

ICS~－5:020.01

B16

中华人民共和国国家标准

GB/T28984-2012

VMP

K

制

香蕉苞片花叶病毒检疫鉴定方法

Detectionandidentificationofbananabractmosaicvirus

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凡机是善

2013-06-01实施

2012-12-31发布

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T28984一2012

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前

在司

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草．

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出井归口．

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本标准起草单位：中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入搅检验检疫

、

局、中国栓验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局．

本标准主要起草人：阔伟刚、郭立新、杨翠云、陈先锋、雷荣、张永江、张明哲、徐瑛、崔俊霞、张慧丽。

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GB/T28984一2012

香蕉苞片花叶病毒检疫鉴定方法

1范圃

本标准规定了香蕉苞片花叶病毒血清学和分子生物学特征的检测方法．

本标准适用于香蕉组培苗和植株等芭蕉属寄主植物材料中香蕉苞片花叶病毒的检测，也适用于甥

虫等传播媒介中该病毒的栓测．

2香蕉苞片花叶病毒基本倩息

中文名：香蕉苞片花叶病毒

学名：bananabractmosaicvirus

缩写：BBrMV

属马铃薯Y病毒属（PotyTJirus），香蕉苞片花叶病毒其他信息参见附录A。

3方法原理

利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定（Doubleantibodysandwichenzyme-linked

immunosorbentassay,D八S-ELISA），体外DNA合成技术的反转录聚合酶链式反应（Reverse

transcriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）、实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-time

fluorescentRT-PCR）进行检测鉴定．

4仪幡设备、用具和试荆

4.1仪锚设备

常规PCR仪、实时荧光PCR仪、超净工作台、电子天平（感量：0.001g）、电泳仪、电泳槽、凝胶成像

系统、高速冷冻离心机、越低温冰箱（－80℃〉、高压灭菌锅、小型食品加工机、微波炉、酶标仪．

4.2用具

可调式微量移液器（2µL、10µL、100µL、200µL、1000µL、50001-1L）及相应的无RNase吸头、无

RNase离心管、PCR管和研钵等．

4.3试剂

主要试剂和缓冲液见附录B和附录c.

5检测

5.1样晶制备

取0.5g~10g畸形、变色等症状的叶片或其他植物组织，在研钵或小型食品加工机中充分研磨，

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建筑.）21…标准（1'i(I)，，.松｜叫

GB/T28984-2012

取五分之一量的均匀后样品，转入离心管中，按1:10（质量：体积〉加入样品提取缓冲液振荡混匀．媒

介昆虫按l:10（质量z体积〉加入样品提取，缓冲液研磨混句.2000g离心10min，上清液即为

OAS-ELISA、RT乎CR和实时荧光RT”PCR检测粗提液．

法，jl取液在3h内使用．否则保存在4℃条件下．

5.2位测方法

5.2.1双抗体酶联免症吸附测定方法（DAS-ELISA)

OAS-ELISA检测应设置对照，用健康的植物组织作阴性对照，用感染BBrMV的植物组织作用性

对照，用样品提取缓冲液作空白对照．其中，阴性对照材料应该尽量与所检测样品一致．

具体操作步骤见附录B.当使用商品化检测试剂盒时，参照试剂盒使用说明进行操作．

5.2.2RT-PCR方法

RT-PCR检测应设置对照，用健康的植物组织作阴性对照，用感染BBrMV的植物组织作阳性对

照，用ddH20作空白对照．

具体操作步骤见附录c.当使用商品化检测试剂盒时，参照试剂盒使用说明进行操作．

5.2.3实时荧光RT-PCR方法

实时RT-PCR检测应设置对照，用健康的植物组织作阴性对照，用感染BBrMV的植物组织作阳性

对照，用ddH20作空白对照．

具体操作步骤见附录D。当使用商品化检测试剂盒时，参照