GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T20752—2006

猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中

硝基咲喃类代谢物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Methodforthedeterminationresiduesofthemetabolitesofnitrofuran

inpork,beef,chicken,porcineliverandaquaticproducts—

LC-MS-MSmethod

2006-12-31发布2007-03-01实施

发布

GB/T20752—2006

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本标准的附录A和附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。

本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。

本标准主要起草人:庞国芳、张进杰、曹彦忠、郭彤彤、曹亚平、范春林、李学民、刘永明。

本标准系首次发布的国家标准。

T

GB/T20752—2006

猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中

硝基咲喃类代谢物残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

1范围

本标准规定了猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)中咲喃它酮(furaltadone)的代

谢物5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁哩烷基酮(3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone,缩写为

AM()Z)、吠喃西林(nitrofurazone)的代谢物氨基腺(seniicarbazide,缩写为SEM)、咲喃妥因(nitro­

furantoin)的代谢物1-氨基-2-内酰K(1-aminohydantoin,缩写为AHD)和庆喃卩坐酮(furazolidone)的代

谢物3-氨基-2-噁瞠烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone，缩写为AOZ)残留量液相色谱-串联质谱测定

方法。

本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)中5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁醴

烷基酮、氨基月尿、1-氨基-2-内酰豚、3-氨基-2-噁哩烷基酮残留量的测定。

本标准方法的检出限：5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁瞠烷基酮、氨基月尿、1-氨基-2-内酰豚、3-氨基-2-噁瞠

烷基酮的检出限均为0.5Mg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3695：1987)

3原理

试样中残留的硝基咲喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或性能相当

的固相萃取柱净化。电喷雾离子化，液相色谱-串联质谱检测。用外标法或同位素标记的内标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙睛：色谱纯。

4.3乙酸乙酯：色谱纯。

4.4磷酸氢二钾，K2HP()4o

4.5乙酸。

4.6二甲亚砚。

4.7盐酸。

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GB/20752—2006

4.8氢氧化钠。

4.92-硝基苯甲醛(2-NBA),C7H5N()3:含量$99%。

4.10磷酸氢二钾溶液：O.1mol/L0称取17.4g磷酸氢二钾(4.4),用水溶解，定容至1000mL。

4.11盐酸溶液：0.2mol/Lo量取17mL浓盐酸(4.7)用水定容至1000mL。

4.12氢氧化钠溶液：1mol/L0称取40g氢氧化钠(4.8),用水溶解,定容至1000mL。

4.13衍生剂：含2-硝基苯甲醛0.05mol/Lc称取0.075g2-硝基苯甲醛(4.9)溶于10mL二甲亚砚

(4.6),现用现配。

4.14样品定容溶液：10mL乙月青(4.2),0.3mL乙酸(4.5),用水稀释到100mL0

4.15四种硝基咲喃代谢物标准物质：咲喃它酮的代谢物5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁醴烷基酮(3-amino-5-

morpholinomethyl-2-oxazolidinone,缩写为AM()Z)、咲喃西林的代谢物氨基IK(scmicarbazide,缩写为

SEM)、咲喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰B(l-aminohydantoin,缩写为AHD)和咲喃醴酮的代谢物

3-氨基-2-噁哇烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone,缩写为AOZ)标准物质，四种标准物质的纯度均

>99%0

4.16四种硝基咲喃代谢物内标标准物质：5-吗咻甲基-3-氨基-2-噁瞠烷基酮的内标物,D5-AM()Z；氨

基月尿的内标物,I3C15N-SEM；1-氨基-2-内酰尿的内标物严G-AHD；3-氨基-2-噁瞠烷基酮的内标物，

D4-A()Zo四种内标标准物质的纯度均$99%。

4.17四种硝基咲喃代谢物标准储备溶液：1.0mg/mLo称取适量的四种硝基咲喃代谢物标准物质

(4.15),分别用甲醇(4.1)稀释成1.0mg/mL的标准储备液。避光保存于一18€冰柜中，可使用六

个月。

4.18四种硝基咲喃代谢物混合标准溶液：0.1Mg/mLo吸取适量四种硝基咲喃代谢物的标准储备溶

液(4.17),用甲醇稀释成0.1卩g/mL的混合标准溶液，避光保存于一18C冰柜中，可使用三个月。

4.19四种硝基咲喃代谢物内标标准储备溶液：1.0mg/mL0称取适量的四种硝基咲喃代谢物内标标

准物质(4.16),分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。避光保存于一1&C冰柜中，可使用六个月。

4.20四种硝基咲喃代谢物内标标准溶液：0.1Mg/mLo移取适量的四种硝基咲喃代谢物内标标准储

备溶液(4.19),用甲醇稀释成0.1Mg/mL的混合内标标准溶液，避光保存于一1&C冰柜中，可使用三

个月。

4.21OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg,3mLo使用前分別用5mL甲醇和10mL水预处理，

保持柱体湿润。

4.220.2Mm滤膜。

5仪器

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。

5.3液体混匀器。

5.4固相萃取装置。

5.5氮气吹干仪。

5.6恒温振荡水浴。

5.7真空泵:真空度应达到80kPa0

5.8微量注射器：25卩L,100mL0

5.9棕色具塞离心管：25mL,50mL。

5.10pH计:测量精度±0.02pH单位。

5.11贮液器：50mL0

5.12离心机:转速4000r/min以上。

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GB/T20752—2006

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

实验室样品用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样。

6.2试样保存

试样置于一181冰柜，避光保存。

7测定步骤

7.1混合基质标准校准溶液的制备

7.1.1样品称取和脱脂

称取5个阴性样品2g（精确到0.01g）,分别置于50niL棕色离心管（5.9）中，加入10mL甲醇-水

混合溶液（2+1）,均质1min,再用5mL甲醇-水混合溶液洗涤均质器刀头，二者合并4000r/min离心

5min,吸取上清液弃掉。向5个离心管中分别加入适量四种硝基咲喃代谢物混合标准溶液（4.18），使

四种硝基咲喃代谢物最终测定浓度分别为0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、

10.0ng/mLo再向每个离心管中加入适量混合内标标准溶液（4.20）,使四种硝基咲喃代谢物内标物最

终测定浓度均为2.0ng/mLo

7.1.2水解和衍生化

向上述每个离心管中加入10mL0.2mol/L盐酸溶液（4.11）均质1min,用10mL0.2mol/L盐酸

溶液洗涤均质器刀头，二者合并后加入0.3mL衍生剂（4.13）,用液体混匀器混匀，置于37C恒温振荡

水浴（5.6）中避光反应16h。

7.1.3净化

上述衍生溶液放置至室温后，加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（4.10）,用1mol/L氢氧化钠

溶液（4.12）调节溶液pH约为7.4,4000r/min离心10min,上清液（若待测样品含脂肪较多，上清液加

5mL正己烷，振荡2min,4000r/min离心10min吸取并弃掉正己烷）倒入下接OasisHLB固相萃取

柱（4.21）的贮液器（5.11）中，在固相萃取装置（5.4）上使样液