DB53/T 944-2019 甘蔗抗褐锈病基因Bru1的PCR检测技术规程

ICS65.020

B15

云南省地方标准

DB53/T944—2019

甘蔗抗褐锈病基因Bru1的PCR

检测技术规程

2019-09-23发布2019-12-23实施

云南省市场监督管理局发布

DB53/T944—2019

前言

本标准按照GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

本标准由云南省农业科学院甘蔗研究所提出。

本标准由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。

本标准起草单位：云南省农业科学院甘蔗研究所。

本标准主要起草人：王晓燕、李文凤、黄应昆、张荣跃、单红丽、仓晓燕、李婕、罗志明、尹炯。

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DB53/T944—2019

甘蔗抗褐锈病基因Bru1的PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了甘蔗抗褐锈病基因Bru1PCR检测方法的原理、设备和器具、引物和试剂、操作步骤

及结果判定等。

本标准适用于甘蔗属及其杂交种抗褐锈病基因Bru1的PCR检测。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文本。

2.1

甘蔗褐锈病

是指由黑顶柄锈菌（PucciniamelanocephalaH.Sydow&P.Sydow）侵染引起的甘蔗病害。

2.2

Bru1

Bru1是在甘蔗栽培品种‘R570’上发现和定位的第1个甘蔗抗褐锈病主效基因，被定位于甘蔗

第7条染色体的0.42cM区域内，该基因对褐锈病菌具有广谱抗性。

3原理

根据甘蔗抗褐锈病基因Bru1序列设计区域特异性引物，提取不同甘蔗品种/材料的总DNA，对试样

进行PCR扩增，依据是否扩增获得预期大小的DNA及酶切片段来判断样品是否携带该抗病基因。

44设备和器具

4.1设备

电子天平（感量0.01g～0.0001g）、涡旋混匀器、恒温水浴锅、台式离心机、PCR扩增仪、微波

炉、电泳槽、电泳仪、凝胶成像仪、-20℃冰箱、可调微量移液器。

4.2器具

移液枪头、离心管、PCR管等，所有器具使用前需经高压蒸汽121℃灭菌30min。

5引物和试剂

5.1基本要求

所有试剂均为分析纯，水为灭菌去离子水。

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DB53/T944—2019

5.2PCR引物

PCR引物为：

a)R12H16标记：上游引物为5′-CTACGATGAAACTACACCCTTGTC-3′，下游引物为

5′-CTTATGTTAGCGTGACCTATGGTC-3′，预期扩增产物长度