GB/T 18654.12-2002 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析

ICS65.150

s50

中华人民共和国国家标准

Gs/T18654.12-2002

养殖鱼类种质检验

第12部分:染色体组型分析

Inspectionofgermplasmforculturedfishes-

Part12;Methodforthekaryotypeanalysis

2002一02一19发布2002一05一01实施

中华人民共和国

发布

国家质量监督检验检疫总局

GB/T18654.12-2002

前言

GB/T18654《养殖鱼类种质检验》分为下列部分:

—第1部分:检验规则;

—第2部分:抽样方法;

—第3部分:性状测定;

—第4部分:年龄与生长的测定;

—第5部分:食性分析;

—第6部分:繁殖性能的测定;

—第7部分:生态特性分析;

—第8部分:耗氧率与临界窒息点的测定;

第9部分:含肉率测定;

第10部分:肌肉营养成分的测定;

—第n部分:肌肉中主要氨基酸含量的测定;

—第12部分:染色体组型分析;

—第13部分:同工酶电泳分析;

—第14部分:DNA含量的测定;

—第15部分:RAPD分析;

本部分为GB/T18654的第12部分。

本部分的附录A、附录B为资料性附录。

本部分由中华人民共和国农业部提出。

本部分由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。

本部分起草单位:中国水产科学研究院长江水产研究所、上海水产大学。

本部分主要起草人:曾勇、徐忠法、李思发、周瑞琼、何力。

GB/T18654.12-2002

养殖鱼类种质检验

第12部分:染色体组型分析

范围

GB/T18654的本部分规定了鱼类染色体组型分析的试剂和材料、仪器和设备、玻片标本的制备和

组型分析。

本部分适用于鱼类染色体组型分析，对于水产养殖中的其他水生动物亦可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T18654的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文

件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成

协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本

部分。

GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法

术语和定义

下列术语和定义适用于GB/T18654的本部分。

体细胞体外培养法somaticcellcultureinvitro

通过无菌操作，获取鱼的肾脏组织或血细胞，在体外培养过程中，加人细胞分裂刺激物，刺激淋巴细

胞大量进人分裂状态。然后，加人适当浓度的秋水仙素，使细胞分裂被阻抑在分裂中期，而获得鱼类细胞

染色体中期分裂相。

体细胞体内培养法somaticcellcultureinvivo

通过向鱼体内注射细胞分裂刺激物，刺激淋巴细胞大量进人分裂状态。然后，取出肾赃组织在生理

盐水中将其撕碎，再加人适当浓度的秋水仙素，或直接向鱼体内注射适当剂量的秋水仙素，从而使细胞

分裂阻抑在分裂中期，获得鱼类细胞染色体中期分裂祖。·

3.3

体细胞直接法directuseofsomaticcells

将小鱼浸泡在适当浓度的秋水仙素溶液中，使其分裂旺盛的鳃丝上皮细胞被阻抑在分裂中期，而获

得鱼类细胞染色体中期分裂相。

3.4

胚胎细胞直接法directlyuseofembryocells

选用发育正常的囊胚期或原肠期早期胚胎，将其细胞吹打分散后，加人适当浓度的秋水仙素，阻抑

在分裂中期，获得鱼类细胞染色体中期分裂相。

3.5

GB/T18654.12-2002

空气干燥法air-dryingtechnique

将收集的细胞经过低渗、固定、滴片，然后斜放静置，待其自然干燥。

3.6

火焰干燥法flame-dryingtechnique

将收集的细胞经过低渗、固定、滴片，然后立即将玻片置于酒精灯的火焰上均匀烘烤，或直接将玻片

置于火焰上滴片。

3.7

胃七七armratio

染色体的长臂长度与短臂长度之比。

3.8

相对长度relativelength

每条染色体长度与单倍体组染色体总长度之比，以百分值或千分值表示。

4方法提要

使用细胞分裂刺激物刺激鱼类淋巴细胞分裂，或者直接收集分裂旺盛鳃丝上皮细胞、胚胎细胞。然

后利用秋水仙素破坏纺锤丝阻抑在分裂中期，再经低渗、固定、滴片和染色，最后进行镜检分析。

5试荆和材料

51肝素溶液:浓度为500IU/mL.

25小牛或胎牛血清。

53.青霉素、链霉素和卡那霉素。

45.培养基:TC-199,RPMI-1640或EaglesMEMo