GB/T 22949-2008 蜂王浆及冻干粉中硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22949—2008

蜂王浆及冻干粉中硝基咪瞠类药物

残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

Determinationnitroimidazoleresiduesinroyaljelly

andlyophilizedroyaljellyfarina—

LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

发布

GB/T22949—2008

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人:殷居易、刘永明、谢东华、陈杰、李金、章再婷、范春林、裘定慧、庞国芳。

T

GB/T22949—2008

蜂王浆及冻干粉中硝基咪呼类药物

残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了蜂王浆及冻干粉中甲硝醴、地美硝哩、替硝醴、洛硝醴、特尼哒哩、异丙硝卩坐，以及径基

化甲硝哩、轻基化异丙硝卩坐、2-轻甲基-1-甲基化-5-硝咪卩坐等9种硝基咪瞠类药物残留量的液相色谱-串

联质谱测定方法。

本标准适用于蜂产品（蜂王浆、冻干粉及蜂蜜）中硝基咪醴类药物残留量的测定。

本标准蜂王浆样品的方法检出限：0.5Mg/kgo

本标准冻干粉样品的方法检出限：1.0.ug/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分:总则与定义（GB/T6379.1-

2004,ISO5725-1：1994,IDT）

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2；1994,IDT）

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD）

3原理

本方法用乙酸钠缓冲液溶解样品基质，乙酸乙酯进行液-液萃取，经过旋转蒸干后，加入四氯化碳和

含酸水溶，离心后取上层溶，运用液相色谱串联三重四极杆质谱仪（LC-MS-MS）进样检测。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1乙睛：色谱纯。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3乙酸乙酯：色谱纯。

4.4甲酸：色谱纯。

4.5四氯化碳。

4.6乙酸钠。

4.7标准品：甲硝卩坐（metronidazole,缩写MNZ；CAS:443-48-1），地美硝瞠（dimetridazole,缩写DMZ；

CAS：551-92-8）,替硝哩（tindazole,缩写TNZ；CAS：19387-91-8）,洛硝哩（ronidazole,缩写RNZ；CAS：

7681-76-7），特尼哒醴（tcrnidazolc,缩写TcrNDZ），异丙硝卩坐（ipronidazole,缩写IPZ），轻基化甲硝咪陞

（metronidazole-OH,缩写MNZ-OH）,轻基化异丙硝瞠（ipronidazole-（）H,缩写IPZ-（）H）,2-轻甲基-1-甲

基化-5-硝咪哩（2-hydroxymethyl-l-methyl-5-nitro-imidazolc,缩写HMMNI）,以上标准物质纯度

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GB/T22949—2008

M98%。内标物为氛代2-轻甲基-1-甲基化-5-硝咪哩（HMMNI-DJCAS：8061-52-7）,M代轻基化异丙

硝哩（IPZ-（）H-D'；CAS：8061-52-7）,M代物质纯度》95%。

4.8标准储备溶：1000Mg/mLo准确称取10.0mg±0.05mg各标准物质，用甲醇溶解于10mL棕

色容量瓶中（可放置于超声波清洗器数分钟促进溶解），定容后配成浓度为1000Mg/mL的标准储备

。将储备液置于一20冰箱中保存备用。

4.9标准中间溶：100ng/mLo可将标准储备溶（4.8）室温下放置5min,使用时用乙睛稀释至所

需浓度，临用临配。

4.10乙酸钠缓冲溶：0.1mol/L0准确称取&204g无水乙酸钠，加入5.83mL冰乙酸定容到

1000mL容量瓶中，超声混合并脱气15min后，于液相色谱流动相瓶中备用。

4.11甲酸水溶：0.1%。准确移取1mL甲酸，用水定容到1000mL容量瓶中，超声混合并脱气15min

后，于液相色谱流动相瓶中备用。

4.12基质混合标准工作：根据标准物质的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的中间浓度混合标准

（4.9）,用空白样品提取液配制成系列浓度的基质混合标准工作。临用临配。

4.13滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联三重四极杆质谱仪（LC-MS-MS）：质谱仪配有大气压化学电离源（或与之等效电离

源）；高效液相色谱配有在线脱气机、低残留自动进样器、可控温柱温箱和高精度混合泵。

5.2电子分析天平：感量0.1mg和10mg。

5.3冷冻离心机：速度可达4000r/min和］3000r/mino

5.4氮吹仪:水浴和加热控温。

5.5台式分散仪。

5.6旋转浓缩仪：带真空蒸发和循环冷却水。

5.7超纯水器。

5.8超声波清洗器。

5.9多功能食品粉碎机。

5.10旋涡混合仪。

5.11鸡心瓶：125mLo

5.12离心管：15mL和50mL；聚四氟乙烯材质。

5.13容量瓶：10mL和1000mL。

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将液体、浆状、粉状的样品充分混合均匀;将低温保存的固体样品进行粉碎磨细后供检测。必要时

将实验室样品用四分法进行缩分。

根据样品的性状和保存要求将样品保存在适当的环境中避免变质。

6.2试样的保存

将试样于一20°冰箱中保存备用。

7测定步骤

7.1提取

称取约2.5g〜5.0g试样（蜂王浆称量5.0g±0.2g;冻干粉称量2.5g±0.2g）于50mL离心管

中，分别添加氛代标示物HMMNI-DJIPZ-（）Hjy（4.7）100卩L,加入20mL乙酸钠缓冲溶（4.10）充

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GB/T22949—2008

分涡旋振荡提取1mino

再加入20mL乙酸乙酯，经过涡旋、液-液萃取，将乙酸乙酯层全部移入鸡心旋蒸瓶，重复上述操作，

合并三次乙酸乙酯提取液于鸡心旋蒸瓶，在40°以下浓缩近干，除去溶剂。

7.2净化

鸡心旋蒸瓶残渣用1mL四氯化碳和1mL甲酸水溶（4.11）溶解，充分涡旋1min。吸取上层水

溶，用微孔过滤膜（0.2“n）过滤，此为试验溶。

7.3色谱测定

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱:WatersSunfireODSia,5ptm,250mmX4.6mm（内径）或相当者；

b）柱温：30°；

c）流动相：0.1%甲酸水溶液;液相梯度见表1;

d）流速：800/jtL/min；

e）进样量:10卩L。

表1液相色谱流动相梯度表

时间/min流动相A（甲酸水溶）/%流动相B（乙膳溶）/%流速/(yL/min)

0.00955800

2.00955800

6.006535800

12.001090800

14.001090800

15.00955800

20.00955800

7.3.2质谱参考条件

a）离子源：大气压化学电离源（或与之等效电离源）；

b）扫描方式：正离子扫描；

c）检测方式：多反应离子监测（MRM）；

d）电喷雾电压（IS）；5250V；

e）雾化气（NEB）相对开放流量：14.00mL/min；

f）气帘气（CUR）相对开放流量：7.00mL/min；

g）离子源温度（TEM）：500P；

h）碰撞池出口电压（CXP）：11V；

i）选择离子驻留吋间（Dwell）：50ms；

j）碰撞池入口电压（EP）：10.0V；

k）碰撞气（CAD）相对开放流量：8mL/min；

l）辅助气流压力：413.8kPa；

m）去簇电压（DP）：35V；

n）焦环聚焦电压（FP）：200V；

o）喷雾器放电针电流（N）：2卩A；

P）检测器参数（正离子化模式），离子流转向电压（DF）：-200.0V；检测器脉冲信号增强电压

（CEM）：2300.0V；

q）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、色谱峰保留吋间见表2。

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表2硝基咪呼类药物中英文名称、定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、色谱峰保留时间

定性离子对定量离子对碰撞气能量色谱峰保留

化合物中文名称化合物英文名称

(/«/z)(必)(CE)/V时间/min

metronidazole-OH18&0/125.925

羟基化甲硝咪吐18&0/125.99.01

缩写：MNZ-OH18&0/144.020

metronidazole172.0/12&022

甲硝吐172.0/12&09.48

缩写:MNZ172.0/82.1035

2-hydroxymethyl-l-methyl-

2-密甲基-1-甲基