GB 29692-2013 食品安全国家标准 牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定 高效液相色谱法

ICS

G

中华人民共和国国家标准

GB29692—2013

食品安全国家标准

牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定

高效液相色谱法

DeterminationofQuinolonesresiduesinmilkbyHighPerformance

LiquidChromatographicmethod

2013-09-16发布2014-01-01实施

中华人民共和国农业部发布

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

目次

目次I

前言III

牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定高效液相色谱法１

方法一１

1范围１

2规范性引用文件１

3原理１

4试剂与材料１

5仪器设备２

6试料的制备与保存２

6.1试料的制备２

6.2试料的保存２

7测定步骤３

7.1提取３

7.2标准曲线制备３

7.3测定３

7.4空白试验３

8结果计算和表述４

9检测方法灵敏度、准确度、精密度４

9.1灵敏度４

9.2准确度４

9.3精密度４

附录A５

方法二６

1范围６

2规范性引用文件６

3原理６

4试剂和材料６

5仪器和设备７

6试样的制备与保存８

6.1试样的制备８

6.2试料的保存８

7测定步骤８

7.1标准曲线的制备８

I

7.2提取８

7.3净化９

7.4测定９

7.5空白试验１０

8结果计算和表述１０

8.1标准曲线校准１０

8.2单点校准１０

9检测方法灵敏度、准确度与精密度１１

9.1灵敏度１１

9.2准确度１１

9.3精密度１１

附录A１２

II

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准系国内首次发布的国家标准。

III

牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定

高效液相色谱法

方法一

1范围

本标准规定了牛奶中喹诺酮类药物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。

本标准适用于牛奶中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星单个或多个药物残留

量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方

研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

3原理

试料中残留的喹诺酮类药物，用乙腈提取，旋转蒸发至近干，流动相溶解。高效液相色谱-荧光测

定，外标法定量。

4试剂与材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。

4.1达氟沙星、恩诺沙星、盐酸环丙沙星、盐酸沙拉沙星和盐酸二氟沙星对照品含量≥99.0%。

4.2磷酸

4.3氢氧化钠

4.4乙腈：色谱纯。

4.5三乙胺

4.6氢氧化钠饱和溶液：取氢氧化钠适量，加水振摇使成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静

置，澄清。

4.75mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和溶液28mL，用水溶解并稀释至100mL。

１

4.80.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6mL，用水溶解并稀释至100mL。

4.90.05mol/L磷酸三乙胺溶液：取磷酸3.4mL，用水溶解并稀释至1000mL。用三乙胺调pH至2.4。

4.10喹诺酮类药物混合标准贮备液：精密称取达氟沙星对照品10mg，恩诺沙星、环丙沙星、沙拉

沙星和二氟沙星对照品各50mg，于50mL量瓶中，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，

配制成达氟沙星浓度为0.2mg/mL，环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星浓度为1mg/mL的喹

诺酮类药物混合标准贮备液。2～8℃保存，有效期3个月。

4.11喹诺酮类药物混合标准工作液：精密量取喹诺酮类药物混合标准贮备液1.0mL，于100mL量瓶中，

用流动相稀释，配制成达氟沙星浓度为2μg/mL，环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星浓度为10

μg/mL的喹诺酮类药物混合标准工作液。2～8℃保存，有效期1周。

5仪器设备

5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。

5.2分析天平：感量0.00001g。

5.3天平：感量0.01g。

5.4振荡器

5.5离心机

5.6聚四氟乙烯离心管：50mL。

5.7鸡心瓶：25mL

5.8滤膜：0.45µm

6试料的制备与保存

6.1试料的制备

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均匀。

——取均质后的供试样品，作为供试试料。

——取均质后的空白样品，作为空白试料。

——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2试料的保存

-20℃以下保存。

２

7测定步骤

7.1提取

称取试料(2±0.05)g，于50mL离心管中，加磷酸100μL，乙腈4mL，涡旋混匀，中速振荡5min，

10000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中，加正已烷5mL，涡旋１min，静置，取下层清液

于25mL鸡心瓶中。残渣中加乙腈4mL，重复提取一次，上清液经同一份正已烷分配，合并两次提

取液，于50℃旋转蒸发至仅剩余不易蒸干的黄色油滴。用流动相1.0mL溶解残余物，滤膜过滤，供

高效液相色谱法测定。

7.2标准曲线制备

精密量取喹诺酮类药物混合标准工作液适量，用流动相稀释，配制成浓度环丙沙星、恩诺沙星、

沙拉沙星和二氟沙星为5、10、50、100、300和500µg/L，达氟沙星浓度为1、2、10、20、60和100