WS/T 362-2011 血清胆固醇参考测量程序 分光光度法

ICS11.020

C50

中华人民共和国卫生行业标准

Ws/T362—

2011

血清胆固醇参考测量程序

分光光度法

spectrophotometry

2011-12-14发布2012-06-01实施

中华人民共和国卫生部发布

Ws/T362-2011

目刂舀

本标准按照GB/T1,⒈—⒛09给出的规则起草。

本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。

本标准起草单位:卫生部北京老年医学研究所。

本标准起草人:董、、

军陈文祥王抒。

Ws/T362-ˉ2011

血清胆固醇参考测量程序

分光光度法

1范围

本标准规定了血清胆固醇参考测量程序(分光光度法)及其质量保证的基本原则。

本标准适用于从事血脂研究的实验室或血脂参考实验室测定胆固醇。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

参考物cemateria【

质refereⅡ

一种或多种特性值足够均匀且已被确定的材料或物质,用于分析测定系统校、

准测定方法评价或为

其他材料或物质赋值。

2.2

证edrefere⒒

有参考物质certiⅡcematerial,CRM

附有证书的参考物质,其一种或多种特性值由已被检定,检定程序可溯源至准确复现的表示这些特

性值的测定单位,检定的每一种特性值都附有给定置信水平的不确定度。

2.3

参考测二re

程序referencemeasurementprocedⅡ

经过充分研究的测定程序,其测定值的不确定度适合其预期用途,尤其在评价测定相同量的其他测

定方法的正确性和鉴定参考物质/方面的用途。

2.4

参考实验室referencemeasurementIaboratory

运行参考测量程序并提供有一定不确定度的测定结果的实验室。

2.5

测定不确定度uncertaintyofmeasurement

表征合理地赋予被测定之值的分散性,与测定结果相联系的参数。

注1:此参数可以是标准差或其倍数,或具有规定置信水平的区间的半宽度。

注2:测定不确定度由多个分量组成。其中些分量可以用列

一系测定结果的统计分布估计,并用实验标准差表征。

另一些分量则可用基于经验或的,也

其他信息假定概率分布估算可用标准差表征。

注3:测定结果应理解为被测定之值的最佳估计,而所有的不确定度分量均对分散性有贡献,包括由系统效应引起

的(如,与修正值和参考测定标准有关的)分量。

3方法原理

以氢氧化钾水解胆固醇酯,正己烷提取胆固、,加人

醇挥发溶剂以、一

醋酸酐浓硫酸、

冰醋酸按定的

比例混合而成的显色剂,分光光度计比色。根据胆固醇标准溶液的浓度和吸光度值计算样本的胆固醇

浓度。

Ws/T362-ˉ2011

4试剂和材料

4.1试剂要求

使用AK法作为参考测量程序测定胆固醇时,适用的试剂种类和要求为:纯胆固醇的有证参考物质

(99.8%±0.1%)、氢氧化钾(优级纯)、浓硫酸(优级纯)、无水乙醇(分析纯)、正己烷(色谱纯)、冰乙酸

(分析纯)、乙酸酐(分析纯)及试剂级纯水。

4.2警告和安全注意事项

方法中需使用酸、

碱和有毒化学试剂。这些试剂应按有关规定分类存放管理。应在通风柜中使用

并远离热源,使用时注意防护并尽可能采取措施减少外溢。如不慎被上述试剂累及应立即冲洗,需要时

请及时就医。

4.3试剂配制

4.3.1氢氧化钾水溶液,5.9mo【

/L(0.33kg/L)

氢氧化钾(固体)常含水lO%~15%,根

据瓶上标签所指明的数字,计算出相当于165g无

水氢氧化

钾的量,迅速称量,溶于400mL水中,冷却后稀释至500mL,混,贮

合均匀存在抗化学腐蚀的聚四氟乙

烯或聚乙烯瓶中,螺旋盖也用同样材料制作。每月新鲜配制。瓶底会有碳酸钾沉淀,吸取时勿搅动。

4.3.2氢氧化钾乙醇溶液,约0.35moⅡ

/L

此试剂易变色,应在临用前配制。以每只测定管、2.5mL计

标准管及空白管各,计算出需要量。

如配制100mL则10mL刻5.9m°

用度吸管吸取l/L氢6。OmL±0.1mL,放

氧化钾水溶液人100mL

量筒中,以无水乙醇稀释至刻度,混匀,倒人具塞锥形瓶中备用。

4.3.3显色剂

醋酸酐(V1)、(V2)、(V3)按y1+v2十

浓硫酸冰醋酸V3=⒛+1+10的比例混合。应在冷水浴或冰

浴中仔细缓慢混合至均匀。用前放人25℃水浴中平衡。

注1:该显色剂稳定性差,在应用的当天根据需要量配制。要有足够量作冲洗加液器用。应在通风橱内隔着防护

板、。

戴橡胶手套操作

“

注2:配好的显色剂应无色,以水调0”时显色剂的吸光度应不超过0.003。如有色则须重配或更换三种试剂并增加

冷却时间。

4,4纯胆固醇参考物质配制标准溶液

4,4.1标准溶液配置前准备工作如下:

——胆固醇干燥:胆固醇纯度标准物质放人玻璃小烧杯或平皿中,烤箱40℃~5o℃压

减干燥

8h~10h;

——

玻璃器具准备:

·容量瓶:100mL至10个,50mL1个

少;

·移液管(奥氏):20mL4支10mL7支5mL2支

吸管、、;

——无水乙醇提前1d放

置实验台保持室温;

——控制室温在25℃左右。

4.4.2标准溶液配制按如下操作:

2

VVs/T362-ˉ2011

一

称、

量溶解和定容:在万分之一天平上精确称取约1.∞00g干胆

燥的固醇参考物质,小心并

完全转移到放置在100mL容一

量瓶上的小玻璃漏斗中,用室温无水乙醇仔细、

冲洗溶解玻璃

小漏斗上的胆固醇至容量瓶中,轻轻摇动容量瓶至胆固醇完全溶解,定容到100mL,充混

分

合。若称取的胆固醇为1,000og,则

此胆固醇溶液的浓度为25,86mmol/L(1000.0mg/

dL);

—

ˉ

一

配制不同浓度胆固醇标准溶液:见表1。用奥氏吸管准确吸取相应浓度的胆固醇溶液至不同

容量瓶,加无水乙醇至刻度,充分混匀;

表1胆固醇标准溶液配制

原胆固醇溶液浓度用奥氏吸管吸取量容量瓶稀释后胆固醇溶液终浓度

mmol/L(mg/dL)mLmLmmd/L(mg/dL)

25.86(1000)

1034(400)

25.86(1ooo)

7.76(300)

25.86(100o)

5.17(200)

25.86(1000)

2.59(100)

25.86(1ooo)bl。29(50)

2.59(100)

0.65(25)

10.34(400)1.03(40)

5.17(200)0.52(20)

2.59(100)0.26(10)

1.29(50)0.13(5)

——储存和使用:分装各标准溶液至1mL安,封口、2年

瓿贴标识,4℃保存。使用时从冰箱冷藏

室中取出、1h,其

平衡温度至少间混合均匀,每次打开用完后弃之;

——

新旧标准溶液的替换:新配制的标准溶液在使用前应与以前使用的标准溶液进行3次~5次

对比,即用本方法同时测定两种标准溶液和不同浓度的质控血清,以两种标准溶液分别作标准

曲线、血

计算质控清胆固醇浓度,两者偏差应小于0.5%。达到此要求即可再完成新旧标准溶

液的替换。

4.5质控血清

制备胆固醇水、一

平高低不同的个体或混合新鲜血清,1mL/支、、⒛℃

分装密封以下冷冻保存。

每一批样本测定时均包括这两种血清。每批质控血清要有足够量,-20℃以下冷冻保存可至少使用

16年。。

不可反复冻融

5仪器设备

5.1通用分光光度计

在波长620nm处以:波