GB/T 22955-2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67．050

X04

囝目

GB／T

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物

残留量的测定液相色谱一串联质谱法

Determinationofbenzimidazolesresiduesinandbakedeel—

fugu．eel

LC—MS—MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

丰瞀鹊鬻瓣訾矬赞星发布中国国家标准化管理委员会仪1”

22955--2008

GB／T

刖鬲

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人；林峰、林海丹、吴映璇、张美金、邵琳智、庞国芳。

GB／T22955--2008

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物

残留量的测定液相色谱一串联质谱法

1范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱一串联质谱检测

方法。

本标准适用于液相色谱一串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢

物奥芬达唑砜，阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑一2一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜，甲苯眯唑及其代

谢物氨基甲苯咪唑、羟基甲苯眯唑，氟苯眯唑及其代谢物2一氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物5一羟基

噻苯咪唑，噻苯咪唑酯，氧苯达唑的残留量。

本标准的方法检出限：奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑一2一氨基砜、阿苯达唑

亚砜、阿苯达唑砜、甲苯眯唑、氨基甲苯眯唑、羟基甲苯咪唑、氟苯眯唑、2一氨基氟苯眯唑、噻苯咪唑、5一羟

基噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑均为0．010

mg／kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

6379．1

GB／T测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第l部分：总则与定义

(GB／T6379．1—2004，ISO5725—1：1994，IDT)

GB／T

6379．2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

6379．2～2004，ISO5725—2：1994，IDT)

性与再现性的基本方法(GB／T

GB／T6682--2008，ISO3696：1987，MOD)

6682分析实验室用水规格和试验方法(GB／T

3原理

试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取、离心、浓缩后，残渣以乙腈-0．1mol／L盐酸溶液溶解，正己烷

脱脂，经MCX固相萃取柱净化。样品溶液供液相色谱一串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB／T6682规定的一级水。

4．1乙酸乙酯。

4．2正己烷。

4．3甲醇：色谱纯。

4．4乙腈：色谱纯。

4．5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。

4．62，6-二叔丁基对甲酚(BHT)。

4．7盐酸。

】

22955--2008

GB／T

4．8氢氧化钾。

4．925％氨水。

4．10甲酸：优级纯。

4．11乙酸铵。

4．121％BHT溶液：称取1．0BHT，乙酸乙酯溶解并稀释至100mL，临用前配制。

g

0．1000

4．13mo|／h盐酸溶液：量取浓盐酸9mL，加水稀释至1mL。

000

4．140．005mL。

mol／L甲酸溶液：准确吸取188pL甲酸，加水稀释至1

4．1550％氢氧化钾溶液：50g氢氧化钾溶解于100mL水中，冷却至室温后待用。

4．16mL

10％氨乙腈溶液：量取i025％氨水，乙腈稀释至100mL，临用前配制。

0．025000

4．17mol／L乙酸铵溶液：1．93mL水中。

g乙酸铵溶解于l

奥芬达唑砜(oxfendazole

sulfoxide，

CAS：54029—12-8)、阿苯达唑砜(albendazole

droxy，CAS：17450500)标准溶液浓度为10mg／L。

4．19标准溶液

4．19．1标准储备液

准确称取按其纯度折算为100％质量的奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑2一氨

基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯眯唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2一氨基氟苯眯唑、

mL，

噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑标准品各10mg(精确至0．1mg)，分别用甲醇溶解并定容至100

配成标准储备溶液浓度为100#g／mL。

4．19．2混合标准工作溶液

合标准工作溶液。混合标准工作溶液使用前配制。

4．20固相萃取柱：阳离子交换固相萃取柱MCX柱或相当者，150mL。使用前依次用5mL甲

mg／6

醇活化、5mL0．1mol／L盐酸平衡。

4．21滤膜：0．2pm。

5仪器

5．1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5．2组织捣碎机。

000

5．3匀浆机：转速大于或等于8r／min。

5．4涡旋振荡器。

000

5．5离心机：转速大于或等于4r／rain。

5．6减压旋转蒸发仪。

5．7超声波水浴。

2

GB／T

5．8分析天平：感量0．1mg，0．01

g。

6制样方法

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装人洁净容

器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7分析步骤

7．1提取

mL

mL乙酸乙酯(4．1)、0．1550％氢

称取2g样品(准确至0．01g)，于50mL离心管中，加入20

mL000

rain，匀浆机上8r／min均质

氧化钾溶液(4．15)、11％BHT溶液(4．12)置超声波水浴中振荡5

30000

S，加入1g无水硫酸钠，混匀，4r／min离心5rain，清液转移至100mL梨形瓶中；另取一离心管，

mLmL

加入20mL乙酸乙酯、0．1550％氢氧化钾溶液和11％BHT溶液洗涤匀浆机刀头；用玻棒捣碎

离心管中的沉淀，加入上述洗涤匀浆机刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2min，置超声

000

min，4r／rain离心5mL梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发至干。

波水浴中振荡5min，清液合并至100

7．2净化

mL0．1

上述残渣马上用1．5mL乙腈溶解，涡旋混匀，超声5min，加入1．5mol／L盐酸溶液

(4．13)，涡旋混匀，转移到15mL离心管，加5mL正己烷(4．2)洗涤梨形瓶，合并转移到离心管中，涡旋

000

混匀，4r／min离心5rain，弃上层正己烷层，加入3mL正己烷重复操作一次。

mL

脱脂后的样液加入30．1mol／L盐酸溶液，涡旋混匀，注入已活化处理的MCX固相萃取柱

mL0．1mL

(4．20)，依次用5mol／L盐酸溶液、5mL甲醇(4．3)淋洗，1510％氨乙腈溶液(4．16)洗脱，洗脱

0．025

mLmol／L

液38℃减压旋转蒸发至干，残渣加入0．5mL乙腈，置超声波水浴中振荡5min，加入1．5

900

乙酸铵溶液(4．17)，涡旋混匀，吸取100pL该样液，加入1pL乙腈一水(1+4)混匀后过0．2pm滤

膜(4．21)，供液相色谱一串联质谱仪测定。

7．3测定条件

7．3．1液相色谱参考条件

mm×2．1

a)色谱柱：YMCC18'3pm，150ram(内径)或相当者；

rain内线性增

b)流动相：乙腈：0．005mol／L甲酸溶液(4．14)，梯度洗脱；乙腈：15％～80％(7

加)，80％保持2rain，80％～15％(o．Olmin内线性递减)，15％保持11rain；

流速：0．25mL／min；

柱温：40℃；

0曲0进样量：5pL。

73质谱参考条件

离子化模式：电喷雾电离正离子模式(EsI+)；

质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；

分辨率：单位分辨率；

2幻∞o山雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流

量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵

敏度；

eJ16种苯并咪唑类药物的定性离子对、定量离子对和去集簇电压、碰撞气能量、参考保留时间见

表l。

3

22955--2008

GB／T

表116种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间、参考质谱参数

去集簇电压／碰撞气能量／参考保留时间／

化合物名称定性离子对(m／g)定量离子对(m／z)

VV

316／15955

奥芬达唑316／159387．9

316／19135

300／15950

芬苯达唑300／2683710．3

300／26835

332／15960

奥芬达唑砜332／3．59318．8

332／30035

266／19150

阿苯达唑266／234329．2

266／23430

240／13345

阿苯达唑2氨基砜240／133352．4

240／19835

282／19155

阿苯达唑亚砜282／208316．7

282／20840

298／22440

阿苯达唑砜298／159557．8

298／15930

296／10550

甲苯咪唑296／264409．1

296／26435

238／10537

氨基甲苯咪唑238／105706．7

238／13351