GB/T 38740-2020 实验动物 猴马尔堡病毒检测方法

ICS65.020.30

B44

中华人民共和国国家标准

/—

GBT387402020

实验动物猴马尔堡病毒检测方法

—()

LaboratoranimalMethodforexaminationofsimianMarburvirusMARV

yg

2020-04-28发布2020-08-01实施

国家市场监督管理总局

发布

国家标准化管理委员会

/—

GBT387402020

前言

本标准按照/—给出的规则起草。

GBT1.12009

本标准由全国实验动物标准化技术委员会(/)提出并归口。

SACTC281

:、、

本标准起草单位海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心中华人民共和国福州海关中华人民

、、、、

共和国成都海关中华人民共和国海口海关中华人民共和国济南海关北京脑科学与类脑研究中心

、。

中华人民共和国海口海关中华人民共和国昆明海关

:、、、、、、、。

本标准主要起草人李丹丹张体银安微王绥家凌宗帅李文龙陈平亚艾军

Ⅰ

/—

GBT387402020

实验动物猴马尔堡病毒检测方法

1范围

本标准规定了猴马尔堡病毒实时荧光RT-PCR检测的操作方法。

本标准适用于猴马尔堡病毒的检测。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/分析实验室用水规格和试验方法

GBT6682

/出入境动物检疫采样

GBT18088

实验室生物安全通用要求

GB19489

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

马尔堡病毒Marburvirus

g

,(),,,

一种高致病性病毒属丝状病毒科Filoviridae单股负链RNA病毒基因组约19.1kb为已知的

最大的负链RNA病毒。

3.2

逆转录实时荧光聚合酶链式反应real-timeuantitativereversetranscritionolmerasechainre-

qppy

;

actionreal-timeRT-PCR

将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR扩增。PCR反应体系中加入一对引

,,

物的同时加入一条特异性的荧光探针该探针为一寡核苷酸片段两端分别标记一个报告荧光基团和一

。,;,

个淬灭荧光基团探针完整时报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收PCR特异性扩增时Taq酶

,,

的外切酶活性将探针酶切降解使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离从而荧光监测系统可接收

5'-3'

,。

到荧光信号实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步

3.3

噪音noise

荧光PCR仪在仅仅使用PCR管和水的状态下的本底荧光强度。

3.4

值

Ctcclethresholdvalue

y

从基线到指数增长的拐点所对应的PCR反应循环次数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

1

/—

GBT387402020

:()

DEPC焦碳酸二乙酯diethlrocarbonate

ypy

:()

dNTP脱氧核苷三磷酸deoxribonucleosidetrihoshate

ypp

:羧基荧光素()

FAM6-6-carbox-fluorescein

y

:()

MARV马尔堡病毒Marburvirus

g

:()

PBS磷酸盐缓冲液hoshate-bufferedsaline

pp

:()

RNA核糖核酸ribonucleicacid

:()

RT-PCR逆转录聚合酶链式反应reversetranscritionolmerasechainreaction

ppy

:()

SDS十二烷基硫酸钠sodiumdodeclsulfate

y

:羧基四甲基若丹明()

TAMRA6-6-carboxtetramethlrhodamine

yy

酶:聚合酶()

TaTaDNATaDNAolmerase

qqqpy

:()[()]

Tris三羟甲基氨基甲烷trishdroxmethlaminomethane

yyy

5试剂或材料

本标准所用水应符合/中一级水的规格要求。

GBT6682

裂解液:或其他等效裂解液。

5.1Trizol