YY/T 0993-2015 医疗器械生物学评价 纳米材料：体外细胞毒性试验(MTT试验和LDH试验)

ICS11.040.30

C30

中华人民共和国医药行业标准

/—

YYT09932015

医疗器械生物学评价纳米材料:

体外细胞毒性试验(试验和试验)

MTTLDH

ㅤㅤㅤㅤ

—:

BioloicalevaluationofmedicaldevicesNanomaterial

g

()

InvitroctotoxicittestsMTTassaandLDHassa

yyyy

2015-03-02发布2016-01-01实施

国家食品药品监督管理总局发布

/—

YYT09932015

目次

前言…………………………Ⅰ

引言…………………………Ⅱ

1范围………………………1

2规范性引用文件…………………………1

、………………………

3术语定义和缩略语1

、…………………

4样品对照品和试剂制备2

5细胞系……………………3

6培养液……………………3

7试验过程…………………4

8数据记录与分析…………………………5

9接受准则…………………6

10结果评定…………………6

()、…………………

附录A资料性附录试剂耗材及设备8

()……………

附录B资料性附录96孔板加样模板示例9

ㅤㅤㅤㅤ

参考文献……………………10

/—

YYT09932015

引言

,

纳米材料引起细胞毒性的机理主要包括对细胞线粒体功能的影响及对细胞膜的损伤可以分别用

(,二甲基噻唑),二苯基氢四氮唑溴()试验和乳酸脱氢酶()试验进行检测。

3-45--2--25--2-MTTLDH

,,

然而有些纳米材料可能对MTT测试和LDH测试有一定的干扰检测时需要排除干扰因素来获得准

。,

确结果为建立适合纳米材料及组合在医疗器械中纳米材料的细胞毒性评价方法本标准作为

/,。,

GBT16886.5细胞毒性试验的补充增加了排除干扰因素的处理方法以及阳性对照的选择同时增

,。

加了LDH试验方法用以定量地评价纳米颗粒对细胞膜的损伤本标准作为适合纳米材料的MTT试

,

验和LDH试验的试验方法标准为正确评价纳米材料及组合在医疗器械中纳米材料的细胞毒性提供

技术支持。

ㅤㅤㅤㅤ

Ⅱ

/—

YYT09932015

医疗器械生物学评价纳米材料:

体外细胞毒性试验(试验和试验)

MTTLDH

1范围

、、

本标准规定了纳米材料及组合在医疗器械中的纳米材料的体外细胞毒性试验方法试样制备操作

步骤及评价。

(

本标准适用于纳米材料及组合在医疗器械中的纳米材料颗粒或纤维被包裹或结合在一种不能释

),。

放或非游离状态的除外的体外细胞毒性评价包括以L929为受试细胞的MTT试验和LDH试验

本标准是/的补充。

GBT16886.5

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/:

医疗器械生物学评价第部分风险管理过程中的评价与试验

GBT16886.11

/:

医疗器械生物学评价第部分体外细胞毒性试验

GBT16886.55

/:

医疗器械生物学评价第部分样品制备与参照样品

ㅤㅤㅤㅤ

GBT16886.1212

、

3术语定义和缩略语

3.1术语和定义

/界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

GBT16886

3.1.1

纳米材料nanomaterial

,

物质结构在三维空间中至少有一维处于纳米尺度或由纳米结构单元构成的且具有特殊性质的

材料。

3.1.2

纳米材料医疗器械nanomaterialmedicaldevices

组合有或含有纳米材料的医疗器械。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

:()

APAP对乙酰氨基酚acetaminohen

p

:()

DMSO二甲基亚砜dimethlsulfoxide

y

:()

FBS胎牛血清fetalbovineserum

:()

L929小鼠成纤维细胞mousefibroblastcell

:()

LDH乳酸脱氢酶lactatedehdroenase

yg

:()

MEM培养液modifiedealesmedium

g

1

/—

YYT09932015

:(,二甲基噻唑),二苯基氢四氮唑溴盐[(,)

MTT3-45--2--25--2-3-45-Dimethl-2-thiazoll-2.5-di-

yy

]

henl-2H-tetrazoliumbromide

py

:()

PBS磷酸盐缓冲液hoshatebufferedsaline

pp

、

4样品对照品和试剂制备

4.1总则

()

试验样品可选用纳米材料用于制备含纳米材料医疗器械的原材料稀释液及纳米材料医疗器械的

。,。

浸提液在试验前宜先对材料进行充分的物理化学表征以便合理地解释生物学反应例如颗粒的大

小和表面化学特性会引起不同的试验结果。

每次试验应包括阳性对照和阴性对照。

、。

试验中使用的试剂耗材及设备详见附录A

:,

注随着国际纳米毒理学研究的进展和认知水平的提高鼓励根据供试品的预期用途和自身特性选择更合适的阳

性对照和阴性对照。

4.2样品稀释液或浸提液的制备

4.2.1样品稀释液

:,。

纳米材料稀释液将纳米材料直接稀释于细胞培养液中制备不同浓度的稀释液

4.2.2样品浸提液

4.2.2.1浸提原则ㅤㅤㅤㅤ

应遵循/的要求制备浸提液:

GBT16886.12

)/(),

a按照GBT16886.12要求的表面积比取材应包含纳米材料在内的部分将纳米材料医疗器

械放入浸提介质中进行浸提;

)也可根据材料特点选择质量比取材。

b

4.2.2.2浸提介质

浸提介质的选择可参照/的要求。

GBT16886.5

:,:、、、

注不同的浸提介质可能会影响纳米颗粒的表面特性如颗粒的大小颗粒的聚集特性表面电荷的变化蛋白质

1

、,。,,

及其他物质的吸附离子的释放等进而影响纳米材料的细胞毒性反应因此浸提介质的选择非常重要宜

阐述选择的理由。

:,。

注根据目前的认知水平推荐使用不含血清的细胞培养液做为纳米材料的浸提介质随着国际纳米毒理学研究

2

,。

的进展和认知水平的提高鼓励根据试验样品的预期用途和纳米材料自身特性选择更合适的浸提介质

4.2.2.3浸提条件

可参照/的要求。

GBT16886.5

,:()。

根据目前的认知水平推荐的浸提条件为37±2℃下不少于24h

,,

在非必需情况下浸提液无需过滤把从纳米材料医疗器械中浸提出的含纳米颗粒和离子的浸提液

;、、,。

用于试验如果进行过滤离心或其他处置方法最终报告中应予以说明对浸提液pH的调整也应在

报告中说明。

:,。

注宜避免对浸提液进行处理例如对的调整