GBZ/T(卫生) 240.20-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第20部分：亚慢性吸入毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.202011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚慢性吸入毒性试验

20

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part20Subchronicinhalationtoxicittest

y

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.202011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚慢性吸入毒性试验

20

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了啮齿类动物亚慢性吸入毒性试验的目的试验概述试验方法数据处

、。

理与结果评价评价报告和结果解释

本部分适用于检测化学品的亚慢性吸入毒性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

/ㅤㅤㅤㅤ。

GBZT240.1界定的术语和定义适用于本文件

3.1

靶器官taretoran

gg

实验动物出现由受试样品引起的明显毒性作用的任何器官。

4试验目的

,、

确定一定时期内经呼吸道反复接触受试化学品引起的毒性作用了解毒作用靶器官损害程度和无

,的浓度提供依据。

作用浓度水平为确定慢性呼吸道毒性试验

5试验概述

,(),

各组实验动物每日经呼吸道吸入不同浓度的受试样品连续染毒个月有时候可根据需要

390d

()。,()。

染毒个月如使用溶剂或其他介质需设溶剂介质对照组试验期间每日观察动物的毒性

6180d

。、。、

反应在染毒期间死亡濒死的动物要进行大体解剖染毒结束后所有存活的动物均要处死剖验以及

作适当的病理组织学检查。

6试验方法

6.1受试样品

6.1.1资料收集

,:

在开始本试验之前应尽量搜集受试样品现有的各种资料

1

/—

GBZT240.202011

)受试样品的商品名和其他名称及号;

aCAS

)、;

b受试样品的结构式分子式和相对分子质量

)、(:、、、、、、、、

c试样品的物理化学性质可包括外观沸点熔点密度折射率光谱资料溶解度挥发性

、、/3、、、);

化学活性稳定性和换算系数光化学性质电离度粒度等

mmm

ppg

)受试样品的分析方法;

d

)、、、;

e受试样品的生产方法合成路线杂质种类与含量

):()。

f储存方法要有长期储存受试样品包括在介质或饲料中的合适方法否则需定期制备新鲜

样品;

)人类每日可能接触的途径和水平。

g

6.1.2接受样品的日期应登记

。,

开始试验前应有适当数量的受试样品样品来源和批号应相同尽可能使用同一批生产的受试样

,,。。,

品否则每一批受试样品的纯度和杂质要分别测定气态受试样品可直接染毒若受试样品为液体

,,。,

可直接雾化后染毒如果较黏稠难以雾化可加入介质作适当稀释若受试样品为固体应将其粉碎后

,();

以粉尘染毒至少应保证相当部分为可吸入性粉尘粒径≤5m也可将固体受试样品溶解至适当的

μ

()。,,,

溶剂介质中雾化后染毒水是首选的介质若采用其他介质应考虑其毒性和刺激性等并按要求设

介质对照。

6.2实验动物和饲养环境

6.2.1动物的选择和观察

ㅤㅤㅤㅤ

,,。

常用啮齿类动物首选大鼠一般选用周周龄的大鼠也可使用其他种属如豚鼠等进行试

6~8

。。试验前动物要在试验环境中至少适应

验动物体重的变动范围按性别不应超出平均体重的20%3d~

,。,

5d并在这段时间内观察实验动物的状态若本试验为其他长期试验的预备试验则本试验所选用的

动物应与以后选用的动物相同。

6.2.2动物的性别和数量

,。,

每一剂量组实验动物至少应有只雌雄各半若在试验过程中处死动物则应增加计划处死的

20

动物数。

6.2.3实验动物和动物试验的环境设施

。,。

实验动物和动物试验的环境设施应符合国家相应规定选用常规饲料饮水不限制动物可分性

,。

别群饲或单只饲养群饲时应能清楚观察笼内每只动物的情况

6.3剂量设计

。,。

试验一般设三个染毒组和一个对照组对照组动物不接触受试样品其他处理均与染毒组相同

,。。

高浓度组应使动物产生较明显的毒性效应但不引起过多动物死亡低浓度组应不出现任何毒性作用

,。,

若掌握人群接触水平则低染毒浓度应高于人群的实际接触水平如剂量设计得当中浓度组可引起较

,,。,,

轻的毒性效应若设多个中浓度组时应产生不同程度的毒性效应此外可另设一追踪观察的附加组

(),,(

选用只动物雌雄各半与高浓度组一同染毒在全程染毒结束后继续观察一段时间一般不少于

20

),、。,,

28d以了解毒性作用的持续性可逆性或迟发毒作用但应注意高浓度组与附加组一起染毒动物

,,

数的增加不应明显影响该组试验条件与其他各组条件的一致否则在试验设计时每组均增加一定的动

。(),。

物数试验结束时每组剖杀部分动物数量以满足统计分析为原则部分动物继续观察

2

/—

GBZT240.202011

6.4染毒时间

,,,。。

按职业接触方式为每天6h在必要时也可延长或缩短染毒时间但应说明理由及依据每周5d

;,。

按环境污染物接触方式为每天23h留下1h给动物喂食和清理染毒柜每周7d受试样品浓度以

/3计。

mm

g

6.5染毒方式

。、。,

应采用动式染毒可采用整体染毒法头面式或口鼻式方法进行整体染毒时动物可舔食皮毛和

,,,

笼具上吸附的受试样品且少量受试样品可能经皮吸收但所需设备较为简便且与实际接触气体化学

;,,

品的模式较一致头面式或口鼻式动式吸入染毒时动物仅头面部或口鼻部暴露在含受试样品空气中

。()。

可避免全身染毒法的缺点染毒期间动物不进食但可饮水头面式或口鼻式除外

、

6.6染毒设施试验环境和受试样品浓度监测

,;

应保证笼内动物不太挤迫使动物能最大限度接触受试样品动物所占体积不超过染毒柜体积的

;;//;;

应保证实验动物的正常需气量染毒柜换气次数次次柜内氧含量定期记录

5%12h~15h≥19%

染毒柜;;,

中温度和相对湿度在试验进行过程中连续监测气流量在动物呼吸带采样测定受试样品浓度

,(),,

在试验开始时每小时一次以后如一周后若浓度稳定可适当减少采样测定的次数有条件时最好能

。,。

连续监测受试样品的浓度染毒柜应保持一定的负压以防受试样品意外漏出

6.7临床观察

ㅤㅤㅤㅤ

,。。

试验期内每天至少观察一次必要时增加观察次数对附加组还要增加至少28d

,、。

观察期间对动物的任何毒性表现均应记录记录内容包括发生时间程度和持续时间观察应至少

:、、、、、

包括如下内容皮肤和被毛眼和黏膜呼吸循环植物神经和中枢神经系统肢体运动和行为活动等改

。,。,

变对死亡动物应进行解剖对质弱或濒死动物应隔离或人道处死和解剖记录每周摄食量经饮水染

,。。

毒时还应记录每天饮水量记录每周体重变化试验结束时处死动物作相关检查

6.8临床检查

6.8.1眼科检查

,,,

在动物染毒前和染毒后最好对所有实验动物至少应对高剂量组和对照组动物使用眼科镜或其

。。

他有关设备进行眼科检查若发现动物有眼科变化则应对所有动物进行检查

6.8.2血常规检查和其他血液指标检查

,。,

至少应在染毒结束时进行必要时应在染毒中期也进行检查如设立附加组染毒结束时如有异常

,。、、

的指标附加组追踪观察结束时应进行检查测定指标至少应包括红细胞压积血红蛋白浓度红细胞

、、,、。

数血小板数白细胞总数和分类必要时测定网织红细胞数凝血功能等指标

6.8.3血液生化检查

,。,

至少应在染毒结束时进行必要时应在染毒中期也进行检查染毒结束时如有异常的指标附加组

。、、、。

追踪观察结束时应进行检查检查指标包括肝功能肾功能电解质平衡碳水化合物代谢等测定指

()、()、()、

标至少应包括丙氨酸氨基转移酶ALT天门冬氨酸氨基转移酶AST碱性磷酸酶ALP乳酸脱氢

()、()、()、()、()、(),

酶LDH尿素氮BUN肌酐Cr总胆红素TBIL白蛋白ALB总蛋白TP等还应根据受试

3

/—

GBZT240.202011

:、、、、

样品可能的毒作用表现补充如下指标如鸟氨酸脱羧酶谷氨酰转肽酶总胆固醇甘油三酯高铁血

γ-

、、、、、、、。,

红蛋白胆碱酯酶钙磷氯钠钾血糖等此外还可根据所观察到的毒性作用进行其他更大范围的

,。

临床生化检查以便进行全面的毒性评价

6.8.4尿液检查

,、、、。

一般须进行尿液的常规检查包括外观pH值尿蛋白尿糖和血细胞如尿样分析可作为预期或

,。

观察得到的毒性指标则可增加有关的尿液检查项目

6.9病理检查

6.9.1大体解剖

,:,,、、。

所有动物皆应进行大体检查内容应包括体表各开口处颅胸腹腔及其内容物解剖分离后的

、、、、()、、、、,,

肝肺肾肾上腺睾丸卵巢附睾脾脑心脏等应尽快称重以防水分丢失并应立即保存在固定液

,。

中备病理组织学检查

、、、、、、()(/)为

心肝脾肺肾脑睾丸卵巢等的绝对质量和脏器系数脏器系数脏器质量体重

=×100%

,。

必测指标必要时加测其他脏器绝对质量和脏器系数

6.9.2病理组织学检查

。、、、、、、、、()、、

肺和气管病理检查为必检指标至少应包括心肝脾肾胃大脑肺气管睾丸卵巢附睾肾

。,、、、、、、、、、

上腺等根据需要还可包括脑桥小脑和大脑皮层脑垂体主动脉胰十二指肠空肠回肠结肠直

、、()、、、、、、、()、、

肠膀胱甲状腺包括甲状旁腺胸腺前列腺子宫乳腺皮肤肌肉胸骨包括骨髓淋巴结眼

ㅤㅤㅤㅤ

球等。

、、、、

如果毒性作用提示或作为被研究的靶器官时还可选择检查唾液腺生殖附属器官皮肤眼股骨

()、(、、)、、、。

包括关节面脊髓包括颈部胸部腰部泪腺雌性乳腺大腿肌肉等

,

要先对高剂量组和对照组动物及系统解剖时发现的异常组织作详尽的病理组织学检查其他剂量

。,

组一般仅在高剂量组有异常发现时才进行检查在附加组应对那些在染毒组呈现毒性作用的组织和

器官进行检查。

、,。、

中低剂量组动物也需做肺的病理组织学检查肺部感染情况可判断动物的健康状况必要时肝

肾做同样检查。

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

可通过表格形,/、、

式总结试验结果显示动物体重和摄食量饮水量试验开始时各组动物数出现毒性

、。

反应的动物数毒性反应的类型和动物出现毒性反应的百分比对所有数据应采用适当的统计学方法

进行评价。

7.2结果评价

,

亚慢性吸入毒性试验结果应结合前期试验结果并考虑到毒性效应指标和解剖及病理组织学检查

。、

结果进行综合评价毒性评价应包括受试样品染毒剂量是否出现毒性反应毒性反应的发生率及其程

。、、、、

度之间的关系这些反应包括行为或临床异常肉眼可见的损伤靶器官体重变化情况死亡效应以及

。。

其他一般或特殊的毒性作用成功的亚慢性试验应能够提出统计学上有意义的NOAEL

4

/—

GBZT240.202011

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)试验方法;

a

)按性别和剂量的毒性反应数据;

b

)试验期内动物死亡的数量和时间;

c

)毒性作用或其他作用;

d

)每种异常症状出现的时间及其转归情况;

e

)、();

f动物体重资料摄食量和或饮水量资料

)(、、、、、

动物暴露资料包括所用染毒装置情况何种设计类型尺寸气源排出气的处理染毒时动

g

)、、、,,;

物的安置情况等空气温湿度计算浓度实测浓度如有可能提供粒子的分散度等

)眼科检查结果;

h

)血液学检查结果;

i

)临床生化检查结果;

j

)大体解剖所见;

k

)病理组织学检查所见的详细描述;

l

)对结果进行处理的统计学方法;

m

)确定;

nNOAEL

)结论。

o

ㅤㅤㅤㅤ

9结果解释

。

亚慢性吸入毒性试验能够提供受试样品在反复吸入接触时的毒性作用资料虽然其试验结果仅能

,有价值的信息。

有限地外推到人但它可为确定人群接触的NOAEL和容许接触水平提供

5