GBZ/T(卫生) 240.7-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第7部分：皮肤致敏试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.72011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分皮肤致敏试验

7

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part7Skinsensitizationtest

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.72011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分皮肤致敏试验

7

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了动物皮肤致敏试验的目的试验概述试验方法评价报告和结果

解释。

本部分适用于检测化学品对皮肤的变态反应性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价的程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义ㅤㅤㅤㅤ

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1

诱导接触inductionexosure

p

机体通过接触受试样品以达到诱导产生过敏状态目的的试验性暴露。

3.2

诱导期inductioneriod

p

机体通过接触受试样品而诱导出过敏状态所需的时间。

3.3

激发接触challeneexosure

gp

,,。

机体接受诱导暴露后再次接触受试样品的试验性暴露以确定皮肤是否会出现过敏反应

4试验目的

确定重复接触化学品对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应及其程度。

5试验概述

实验动物通过多次皮肤涂抹诱导接触受试样品、、(),

0d7d14d诱导期后给予激发剂量的受试样

,,。

品观察实验动物并与对照动物比较对激发接触受试样品的皮肤反应强度

1

/—

GBZT240.72011

6试验方法

6.1实验动物和饲养环境

6.1.1动物种属

、,。,。

首选健康成年的白色豚鼠体重250~300如选择其他种属试验者需提供选择的依据

gg

6.1.2动物实验室和饲养

。。。

动物实验室应符合国家相应规定动物自由饮食和饮水需提供富含维生素的食物

C

6.1.3动物数量和性别

。()

动物数量和性别依赖于选择的试验方法两种性别均可用于局部封闭涂皮法Buehlertest和豚

鼠最大反应试验()。雌性动物应该是未生育过和未怀孕的。试验要求试验组至少只

GPMTBuehler20

,。,,

豚鼠对照组至少只豚鼠要求试验组至少只豚鼠对照组至少只豚鼠如果试验结果

10GPMT105

,,,。

难以确定受试样品的致敏性应增加动物数试验组至少只豚鼠对照组至少只豚鼠

2010

6.2试验方法可靠性的检查

/。

使用已知的能引起轻度中度致敏的阳性物并每隔个月检查一次局部封闭涂皮法至少有

630%

;。:

动物出现皮肤过敏反应GPMT至少有60%动物出现皮肤过敏反应阳性物一般采用

———己苯乙烯醛();ㅤㅤㅤㅤ

hexlcinnamaldehde

yy

———巯基苯并噻唑();

2-mercatobenzothiazole

p

———氨基苯甲酸乙酯();

ethl4-aminobenzoate

y-

———二硝基氯苯(,);

24-dinitrochlorobenzene

———DER331环氧树脂()。

DER331eoxresins

py

6.3剂量设计

()。

试验剂量水平可以通过少量动物只只的预试验获得诱导剂量为能足以引起皮肤轻度刺

2~3

,。

激反应的浓度激发剂量为不能引起皮肤刺激作用的最高剂量

,()

水溶性受试样品可用水或无刺激性表面活性剂作为介质其他受试样品可用80%乙醇诱导接触

()。

或丙酮激发接触作介质

6.4试验步骤

局部封闭涂皮法()

6.4.1Buehlertest

:,。

动物数试验组至少只对照组至少只

2010

6.4.1.1剂量水平

,;

在试验中设阴性对照组在诱导接触时该组仅涂以溶剂作为对照在激发接触时该组涂以受试样

。。、

品对照组动物应与受试样品组动物为同一批在实验室开展致敏反应试验初期或使用新的动物种

,。

属或品系时需同时设阳性对照组

6.4.1.2诱导接触

,。

试验前24h实验动物背部左侧去毛去毛范围为3cm×3cm

2

/—

GBZT240.72011

、、()

于第天第天第天分别将新配制的受试样品最小刺激浓度涂布在背

07140.2mL~0.4mL

,,,

部左侧的区域以层纱布和层玻璃纸覆盖再以无刺激胶带封闭固定后移去敷贴

2cm×2cm216h

,。

物清除残留受试样品

6.4.1.3激发接触

,,(,

末次诱导周后即第天将受试样品最大无刺激浓度建议为诱导浓度的

2280.2mL~0.4mL

/)(),

敷贴于豚鼠右侧背部的脱毛区试验前去毛然后用层纱布和层玻璃纸覆

122cm×2cm24h21

,,,,。

盖后者紧贴皮肤再以无刺激胶带封闭固定6h后移去敷贴物清洗方法同前

6.4.1.4结果观察与评价

、。。

在后分别观察局部皮肤反应用盲法观察对照组和试验组按表对局部皮肤反应评

24h48h1

。,,,

分当受试样品组动物出现皮肤反应积分≥2时判为该动物出现皮肤致敏反应阳性并计算致敏率

按表判定受试样品的致敏强度。

2

,,的对照组或新的对照组进行比较。

如果结果可疑该动物可以周后重新激发用最初

6.4.1.51

表皮肤致敏反应试验评分标准

1

反应评分

无反应0

()

轻微的红斑勉强可见1

()

红斑和焦痂形成明显红斑散在或小块红斑2

中度重度红斑

-3

ㅤㅤㅤㅤ

()

严重红斑紫红色至轻微焦痂形成4

无水肿0

()

轻微水肿勉强可见1

水肿形成

()

中度水肿皮肤隆起轮廓清楚2

()

严重水肿皮肤隆起约1cm或以上3

最高积分7

:。

注皮肤致敏程度分级同表2

表皮肤致敏反应试验分级标准

2

致敏率/%等级致敏程度

<9Ⅰ弱

9~Ⅱ轻度

29~Ⅲ中度

65~Ⅳ强

≥81Ⅴ极强

:,,

注致敏率是反应评分为或以上的动物数占该组动物总数的百分比级致敏度没有意义在实际使用下无致

1Ⅰ

敏危险。

3

/—

GBZT240.72011

豚鼠最大反应试验(,)

6.4.2GuineaPiMaximizationTestGPMT

g

采用完全福氏佐剂(,)皮内注射方法检测致敏的可能性。

FreundComleteAdvantFCA

pj

6.4.2.1动物数

,。,,

试验组至少用对照组至少只如果试验结果难以确定受试样品的致敏性应增加动物数试

105

,。

验组只对照组只

2010

6.4.2.2剂量水平

()。

试验剂量水平可以通过少量动物只只的预试验获得诱导剂量为能足以引起皮肤轻度刺

2~3

,。

激反应的浓度激发剂量为不能引起皮肤刺激作用的最高剂量

6.4.2.3试验步骤

()

诱导接触第天

6.4.2.3.10

诱导接触应按如下步骤操作:

):(),

a受试样品组将颈背部去毛区2cm×4cm中线两侧划定三个对称点每点皮内注射0.1mL

下述溶液。

()/;

第点体积比水或生理盐水的混合物

11∶1FCA

第点耐受浓度的受试样品;

2

ㅤㅤㅤㅤ

()/,。

第点用体积比水或生理盐水配制的受试物浓度与第点相同

31∶1FCA2

):。

b对照组注射部位同受试样品

()/;

第点体积比水或生理盐水的混合物

11∶1FCA

第点未稀释的介质;

2

()/。

第点用体积比水或生理盐水配制的质量浓度为50%的介质

31∶1FCA

()

诱导接触第天

6.4.2.3.27

(),

将涂有0.5mL受试样品的2cm×4cm滤纸敷贴在上述再次去毛的注射部位然后用两层纱

g

,,。,,

布一层玻璃纸覆盖无刺激胶布封闭固定48h对无皮肤刺激作用的受试样品可加强致敏于第二次

诱导接触前在注射部位涂抹十二烷基硫酸钠()。对照组仅用介质作诱导处理。

24h10%SLS0.5mL

()

激发接触第天

6.4.2.3.321

,(),

将豚鼠躯干部去毛用涂有0.5mL受试样品的2cm×2cm滤纸片敷贴在去毛区然后再用两

g

,,。。

层纱布一层玻璃纸覆盖无刺激胶布封闭固定24h对照组动物作同样处理如激发接触所得结果不

,。。

能确定可在第一次激发接触一周后进行第二次激发接触对照组作同步处理

6.4.2.3.4观察及结果评价

,、,(

激发接触结束除去涂有受试样品的滤纸后24h和观察皮肤反应如需要清除受试残留

48h72h

),。

物可用水或选用不改变皮肤已有反应和不损伤皮肤的溶剂按表评分当受试样品组动物皮肤反应

3

,,。

积分时应判为皮肤致敏反应阳性按表对受试样品进行致敏强度分级

≥12

4

/—

GBZT240.72011

表皮肤致敏反应试验评分标准

3

反应评分

无反应0

散在或小块红斑1

、

中度弥漫的红斑轻度水肿2

、

严重的红斑水肿3

7评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下方面

),、;

a阳性试验信息包括阳性对照物试验方法和试验时间

)评分等级系统的简要描述;

b

),,。

c诱导和激发使用的介质如果不是水和生理盐水说明使用的理由任何可能与受试样品反

、、;

应或增强或妨碍吸收的原料均应报告

),;

d诱导和激发使用受试样品的总量每次使用的技术

)结论。

e

8结果解释

ㅤㅤㅤㅤ,。

试验结果应能得出受试样品的致敏能力和强度这些结果只能在很有限的范围内外推到人类

5