GBZ/T(卫生) 240.18-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第18部分：亚慢性经口毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.182011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚慢性经口毒性试验

18

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part18Subchronicoraltoxicittest

y

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.182011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚慢性经口毒性试验

18

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了啮齿类动物亚慢性经口毒性试验目的试验概述试验方法数据处理

、。

与结果评价评价报告和结果解释

本部分适用于检测化学品的亚慢性经口毒性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒性评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1

靶器官taretoran

gg

,。

化学物质在体内呈现毒作用并引起典型病变的主要器官

4试验目的

,,

确定一定时期内经口反复接触受试化学品引起的毒性作用了解受试样品毒作用的靶器官取得受

,性试验的剂量和初步计算人群接触的安全水平提供依据。

试样品亚慢性经口的NOAEL为确定慢性毒

5试验概述

,(),

各组实验动物每日经口摄入不同剂量的受试样品连续染毒个月有时可根据需要染毒

390d

(),。、。

6个月180d染毒期间每日观察动物的毒性反应在染毒期间死亡濒死的动物要进行大体解剖

、。

染毒结束后所有存活的动物均要处死剖检以及作适当的病理组织学检查

6试验方法

6.1受试样品

,:

6.1.1在开始本试验之前应尽量搜集受试样品现有的以下各种资料

)受试样品的商品名和其他名称及号。

aCAS

1

/—

GBZT240.182011

)、。

b受试样品的结构式分子式和相对分子质量

)(:、、、、、、、、

c受试样品的理化性质可包括外观沸点熔点折射率密度光谱资料溶解度挥发性化学

、、、)。()。

活性光化学性质电离度粒度等重要的参数还包括稳定性包括在介质或饲料中

)受试样品的分析方法。

d

)、、、。

e受试样品的生产方法合成路线杂质种类和含量

)()。。

f受试样品包括在介质或饲料中要有长期储存的合适方法否则需定期制备新鲜样品

)人类每日可能接触的途径和水平。

g

。。,

6.1.2接受样品的日期应登记开始试验前应有适当数量的受试样品样品来源和批号应相同尽可

,,。

能使用同一批生产的受试样品否则每一批受试样品的纯度和杂质要分别测定

6.2实验动物和饲养环境

6.2.1实验动物

,。,

常规选择啮齿类动物首选大鼠动物断奶后尽早进行试验尽量使动物在其体重快速增长期有更

。,,别不应超出平

长的时间接触受试样品大鼠周龄最好不可超过周龄但动物体重的变动范围按性

69

)。,

均体重的20%染毒开始前至少要有3d时间使实验动物适应相应的饲养环境并在这段时间内观察

实验动物的状态。

6.2.2动物的性别和数量

,,。,

实验动物随机分组每组至少只雌雄各半但是考虑到亚慢性试验的重要性应适当增加每组

20

。,。

雌雄动物数若计划在试验过程中处死动物需增加计划处死的动物数试验结束时的动物数需达到

ㅤㅤㅤㅤ

能够有效评价受试样品毒性作用的数量。

6.2.3环境设施

,

试验前动物应在符合国家相应规定的试验环境中适应3d再随机分配到各试验组和对照组动物最

,。

好单笼饲养大鼠群养时每笼不超过只

5

6.3剂量设计

。,

试验一般设三个染毒组和一个对照组对照组动物不接触受试样品其他处理条件均与染毒组相

。,(),

同高剂量组剂量应使动物产生较明显的毒性效应但不引起过多动物死亡死亡率不应超过10%

。。,

以免影响结果评价低剂量组应不出现任何毒性作用若掌握人群接触水平则低剂量组剂量应高于

。,,,

人群的实际接触水平如剂量设计得当中剂量组可出现较轻的毒性效应若设多个中剂量组时应产

。,,(),

生不同程度的毒性效应此外可另设一附加组作追踪观察选用只动物雌雄各半给予高剂量受

20

,,(),、

试样品染毒90d在全程染毒结束后继续观察一段时间一般不少于28d以了解毒性作用的持续性

;,(

可逆性或迟发毒作用也可在试验设计时每组增加一定的动物数试验结束时每组剖杀部分动物数量

),。

应满足统计分析部分动物继续作追踪观察

6.4受试样品处理

,,

若为染毒目的加入其他溶剂或赋形剂这些溶剂或赋形剂不应影响受试样品的吸收和毒性作用必

要时应设相应的溶剂或赋形剂对照组。

,,

如果受试样品的毒性较低则加入饲料的受试样品比例较大应注意混入饲料中的受试样品不应超

,。,

过5%否则会对动物正常营养产生影响必要时应定期监测饲料或饮水中的受试样品浓度观察其均

匀性和稳定性。

2

/—

GBZT240.182011

6.5染毒方法

,。

常用的方法是将受试样品混入饲料或饮水中每周7d染毒若受试样品引起饲料和饮水的适口

,,,,

性不良影响动物正常摄入量或由于某种原因受试样品不能加入饲料和饮水中可采用灌胃法或药囊

,。,,()

法此时每周可染毒5d若采用灌胃方式染毒则每日染毒时点应相同并定期每周按体重调整灌

,。。

胃量维持染毒剂量不变其他的染毒方式要加以特殊说明试验期间各组动物染毒的方式应完全

相同。

6.6限量试验

,/体重或以上除人类接触水平的资料表明需用高剂量

在试验中如果剂量预期达每天1000mk

gg

,,

进行试验外时仍未产生可观测到的毒性效应而且根据相关结构化合物可以预测受试样品毒性时可不

必设三个剂量水平进行试验。

6.7临床观察

,。。

验期内每天至少观察一次必要时增加观察次数对附加组还要增加至少28d

,、。

观察期间对动物的任何毒性表现均应记录记录内容包括发生时间程度和持续时间观察应至少

:、、、、、

包括如下内容皮肤和被毛眼和黏膜呼吸循环植物神经和中枢神经系统肢体运动和行为活动等改

。,。,

变对死亡动物应进行解剖对质弱或濒死动物应隔离或人道处死和解剖记录每周摄食量经饮水染

,。。

毒时还应记录每天饮水量记录每周体重变化试验结束时处死动物作相关检查

6.8临床检查

ㅤㅤㅤㅤ

6.8.1眼科检查

,,。

在动物染毒前后至少应对高剂量组和对照组动物使用眼科镜或其他有关设备进行眼科检查若

发现动物有眼科变化则应对所有动物进行检查。

6.8.2血液学检查

、、、,

试验结束时测定血红蛋白浓度红细胞数白细胞总数和分类计数红细胞压积等必要时测定凝血

、、。

功能如凝血时间凝血酶原时间凝血激酶时间或血小板等指标

,。

血液标本应在专用实验室采取并在适当条件下储存

6.8.3血液生化检查

,。,

至少应在染毒结束时进行必要时应在染毒中期也进行检查染毒结束时如有异常的指标附加组

。、、、。测定指

追踪观察结束时应进行检查检查指标包括肝功能肾功能电解质平衡碳水化合物代谢等

()、()、()、

标至少应包括丙氨酸氨基转移酶ALT天门冬氨酸氨基转移酶AST碱性磷酸酶ALP乳酸脱氢

()、()、()、()、()、(),

酶LDH尿素氮BUN肌酐Cr总胆红素TBIL白蛋白ALB总蛋白TP等还应根据受试

:、、、、

样品可能的毒作用表现补充如下指标如鸟氨酸脱羧酶谷氨酰转肽酶总胆固醇甘油三酯高铁血

γ-

、、、、、、、。,

红蛋白胆碱酯酶钙磷氯钠钾血糖等此外还可根据所观察到的毒性作用进行其他更大范围的

,。

临床生化检查以便进行全面的毒性评价

6.8.4尿液检查

,、、、。

一般应进行尿液的常规检查包括外观pH值尿蛋白尿糖和血细胞如尿样分析可作为预期或

,。

观察得到的毒性指标则可增加有关的尿液检查项目

3

/—

GBZT240.182011

6.9病理检查

6.9.1大体解剖

,:,,、、。

所有动物皆应进行大体检查内容应包括体表各开口处颅胸腹腔及其内容物解剖分离后的

、、、、()、、、、,,

肝肺肾肾上腺睾丸卵巢附睾脾脑心脏等应尽快称重以防水分丢失并应立即保存在固定液

,。

中供病理组织学检查

、、、、、、()(/)

心肝脾肺肾脑睾丸卵巢等的绝对质量和脏器系数脏器系数脏器质量体重为

=×100%

,。

必测指标必要时加测其他脏器绝对质量和脏器系数

6.9.2病理组织学检查

、、、、、、、()、、。,

通常至少应包括心肝脾肾胃大脑肺睾丸卵巢附睾肾上腺等根据需要还可包括脑

、、、、、、、、、、、、(

桥小脑和大脑皮层脑垂体主动脉气管胰十二指肠空肠回肠结肠直肠膀胱甲状腺包括甲

)、、、、、、、()、、。

状旁腺胸腺前列腺子宫乳腺皮肤肌肉胸骨包括骨髓淋巴结眼球等

、、、(

如果毒性作用提示或作为被研究的靶器官时还可选择检查唾液腺生殖附属器官眼股骨包括关

)、(、、)、、、。

节面脊髓包括颈部胸部腰部泪腺雌性乳腺大腿肌肉等

,

要先对高剂量组和对照组动物及系统解剖时发现的异常组织作详尽的病理组织学检查其他剂量

。,

组一般仅在高剂量组有异常发现时才进行检查在附加组应对那些在染毒组呈现毒性作用的组织和

器官进行检查。

、,。

中低剂量组动物也需做肺的病理组织学检查肺部感染情况可判断动物的健康状况必要时可对

、。

肝肾做同样检查

ㅤㅤㅤㅤ

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

,/、、

可通过表格形式总结试验结果显示动物体重和摄食量饮水量试验开始时各组动物数出现毒性

、。

反应的动物数毒性反应的类型和动物出现毒性反应的百分比对所有数据应采用适当的统计学方法

进行评价。

7.2结果评价

,

亚慢性经口毒性试验结果应结合前期试验结果综合考虑毒性效应指标和解剖及病理组织学检查

。、

结果进行综合评价毒性评价应包括受试样品染毒剂量是否出现毒性反应毒性反应的发生率及其程

。、、、、

度间的关系这些反应包括行为或临床异常肉眼可见的损伤靶器官体重变化情况死亡效应以及其

。。

他一般或特殊的毒性作用成功的亚慢性试验应能够提出统计学上有意义的NOAEL

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)试验方法;

a

)按性别和剂量的毒性反应数据;

b

)试验期内动物死亡的数量和时间;

c

d)毒性作用或其他作用;

)每种异常症状出现的时间及其转归情况;

e

4

/—

GBZT240.182011

)、;

f动物体重资料摄食量和饮水量资料

)眼科检查结果;

g

)血液学检查结果;

h

)临床生化检查结果;

i

)大体解剖所见;

j

)病理组织学检查所见的详细描述;

k

)对结果进行处理的统计学方法;

l

)确定;

mNOAEL

)结论。

n

9结果解释

。

亚慢性经口毒性试验能够提供受试样品在经口反复接触时的毒性作用资料虽然其试验结果仅能

,。

有限地外推到人但它可为确定人群接触的NOAEL和允许接触水平提供有价值的信息

ㅤㅤㅤㅤ

5