GBZ/T(卫生) 240.25-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第25部分：慢性经皮毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.252011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分慢性经皮毒性试验

25

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part25Chronicdermaltoxicittest

y

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.252011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分慢性经皮毒性试验

25

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了动物慢性经皮毒性试验的目的试验概述试验方法数据处理与结果

、。

评价评价报告和结果解释

本部分适用于检测化学品的慢性经皮毒性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1ㅤㅤㅤㅤ

慢性经皮毒性chronicdermaltoxicit

y

动物在正常生命期的大部分时间内经皮接触受试样品所引起的健康损害效应。

3.2

靶器官taretoran

gg

实验动物出现的由受试样品引起的明显毒性作用的任何器官。

4试验目的

(),、

实验动物经皮途径反复给予不同剂量浓度的受试样品观察实验动物的慢性毒性效应严重程

、,(),

度靶器官和损害的可逆性确定无作用剂量浓度为拟定人类经皮接触该受试样品的职业接触限值

的制定提供依据。

5试验概述

,,

在实验动物的大部分生命期间将用受试样品对动物经皮染毒通常连续染毒年以上观察动物的

1

,、、,。

中毒表现并进行生化指标血液学指标病理组织学等检查以阐明此受试样品的慢性毒性

6试验方法

6.1受试样品

6.1.1资料收集

,:

在开始本试验之前应尽量搜集受试样品现有的各种资料

1

/—

GBZT240.252011

)受试样品的商品名和其他名称及号;

aCAS

)、;

b受试样品的结构式分子式和相对分子质量

)、(:、、、、、、、

c受试样品的物理化学性质可包括外观沸点熔点折射率光谱资料溶解度挥发性化学

、、、、)。(

活性光化学性质电离度粒度密度等重要的参数还包括稳定性包括在介质中的稳

定性);

)受试样品的分析方法;

d

)、、、;

e受试样品的生产方法合成路线杂质种类和含量

)(),;

f受试样品包括在介质要有长期储存的合适方法否则需定期制备新鲜样品

)人类可能接触的途径和水平。

g

6.1.2登记接受样品的日期

。,

开始试验前应有适当数量的受试样品样品来源和批号应相同尽可能使用同一批生产的受试样

,,。

品否则应分别测定每一批受试样品的纯度和杂质

6.2实验动物和饲养环境

6.2.1实验动物的种类和品系

,、、、

为选择合适的动物种类和品系应进行有关的急性亚急性亚慢性蓄积毒性甚至毒物动力学试

。。,

验所选用的品系应对该类受试样品的慢性毒性作用敏感通常需用两种动物进行慢性试验一种为

,;,,。

啮齿类动物首选大鼠另一种为非啮齿类动物常用狗等动物但国际上对使用这类动物有诸多限制

,。

如果仅有啮齿类动物的资料将资料外推到人时敏感性降低

ㅤㅤㅤㅤ

、

6.2.2实验动物的年龄数量和性别

,。

啮齿类动物断奶后应在短期适应环境后尽快开始试验尽早使动物在生长的快速期接触受试样品

(),,

每组动物不少于只非啮齿类动物每组至少只雌雄各半同性别体重差异不超过平均体重的

408

。,,

10%如试验期间计划提前剖杀一些动物或在染毒结束时留一部分动物继续观察应在试验开始时相

。。

应增加动物数量试验结束时各剂量组每种性别的动物应能满足统计学要求

6.2.3饲养和环境

,

6.2.3.1实验动物和动物试验的环境设施应符合国家相应规定应有合理的动物管理措施并严格控制

,。、、、、、、

环境条件尽量减少人员流动饲养条件饲料的杂质空气饮水垫料疾病药物治疗等都可对试验

结果产生影响。

;(

6.2.3.2每一房间只能饲养一种动物每一房间只供一种受试样品试验用除非有证据表明不同受试

),。

样品对动物无影响也应考虑受试样品对对照组动物的影响

,,

6.2.3.3笼具等物品应便于消毒和清洁应避免使用消毒剂和农药等特别是与动物有密切接触的部

,。,

位更应注意因为这类活性物质对试验结果可能产生影响饲料应满足动物营养需要应定期分析饲料

(),,。

成分包括营养成分和杂质等不含对试验有影响的杂质分析结果应在评价报告列出

。,。。

6.2.3.4必要时应监测饮水的水质食盒内饲料应定期更换约每周一次动物自由饮水

6.3剂量设计

。、、、

6.3.1一般应设三个剂量组及一个对照组剂量选择可根据急性毒性亚急性毒性亚慢性毒性蓄积

。,;

毒性和代谢研究等资料确定高剂量组可以出现某些较轻或较明显的毒性反应个别动物可能死亡低

;,。

剂量不应引起任何毒性反应中剂量界于高剂量和低剂量之间动物可能产生轻微的毒性效应

2

/—

GBZT240.252011

,。

6.3.2若掌握人群接触水平则最低染毒剂量应高于人群的实际接触水平

,。

6.3.3对照组动物除不接触受试样品及其他介质外其他处理均与染毒组相同若染毒应加入溶剂或

,,。

添加剂这些溶剂或添加剂不应影响受试样品的吸收或引起毒性作用同时还应设相应的助剂对照组

,(),,,

可另设一追踪观察组即选用只动物雌雄各半给予高剂量受试样品染毒两年在全程染

6.3.420

(),、;

毒结束后继续观察一段时间一般不少于28d以了解毒性作用的持续性可逆性或迟发毒作用也可

,(),

在试验设计时每组增加一定的动物数试验结束时每组剖杀部分动物数量应满足统计分析部分动物

继续作追踪观察。

,,

6.3.5若受试样品引起严重的皮肤刺激效应应降低受试样品的使用浓度尽管这样可导致原来在高

()。,,

浓度或高剂量下出现的毒性作用减弱或消失若试验早期动物的皮肤受到严重损伤则应终止试验

并降低浓度重新开始试验。

,/,

6.3.6本试验中如果每日接触水平超过1000mk体重时仍未产生可观测到的毒性效应而且可

gg

,。

以根据化合物的构效关系预测受试样品毒性时则不必进行三个剂量水平的全面试验观察

6.4试验方法

,,,

6.4.1染毒前24h对动物躯干背部染毒区备皮备皮时应小心不可损伤动物皮肤以免引起皮肤通透

。,,。

性的改变此后视动物被毛生长情况每周要对染毒部位备皮一次各组的备皮时间及面积应相同受

,,

试样品应尽可能薄而均匀地涂敷于整个染毒区域染毒部位的面积约相当于动物体表面积的10%应

,,。

通过测定动物体重确定染毒部位的面积若受试样品毒性较大可相对减小染毒区域的面积应使用玻

,。

璃纸和无刺激的胶带将受试样品固定以保证受试样品与皮肤有良好的接触和防止受试样品脱落染

,,。

毒时还应采用必要的措施防止动物舔食受试样品如对动物进行固定时应有一定程度的松动

(),,,。

6.4.2通常每天染毒一次6h理想的染毒周期是每周7d但考虑到实际情况每周也可染毒5d

ㅤㅤㅤㅤ

,,

染毒的第个月每周按体重调节一次染毒量以后每月调整一次染毒量半年以后每月调整

6.4.313

一次。

,,。

染毒周期动物连续染毒年以上小鼠通常为一年半大鼠通常为年

6.4.412

6.5临床观察

,,,

试验期内每天至少详细观察一次必要时增加观察次数并采取适当的措施尽量减少动物损失如

,、、,

对死亡动物进行解剖对质弱或濒死动物隔离处死冷藏并剖验仔细记录毒性作用的开始时间及其进

,、。

展情况减少因疾病自溶或被同类所食造成的动物损失

,、、,

观察期间应记录动物的任何毒性表现包括神经系统眼睛变化肿瘤和死亡等记录其开始时间及

进展情况。

,,。

逐个记录体重变化前周每周记录一次此后每周记录一次摄食量在前周每周记录一

13413

,。

次此后如动物健康状况或体重无异常改变则至少一个月记录一次

6.6临床检查

6.6.1血常规检查和其他血液指标检查

、、、、、

检查指标可包括血红蛋白浓度红细胞压积红细胞数血小板数白细胞计数与分类凝血功能等

。(,

指标在染毒开始后第个月和第个月各检查一次如果没有该种动物品系的历史资料时可在试验

36

),,。,

开始时做正常值此后每隔个月检查一次试验结束时检查一次大鼠每组每性别可检查只非

610

。。

啮齿类动物应全部应检查每次检查的动物最好相同

,。

在试验过程中如有动物健康状况恶化应对该动物作白细胞分类计数白细胞分类计数通常先在

,。

高剂量组和对照组进行如高剂量组有问题才依次再检查较低剂量组动物

3

/—

GBZT240.252011

6.6.2尿液检查

,,,

收集各组动物尿样进行分析大鼠每组每性别可检查只非啮齿类动物应全部检查每次检查的

10

,。

动物最好相同检查时间间隔与血常规检查一致

、、、。

尿液的常规检查包括外观pH值尿蛋白尿糖和血细胞如尿样分析可作为预期或观察得到的

,。

毒性指标则可增加有关的尿液检查项目

6.6.3临床生化检查

(,

在染毒开始后第个月和第个月各检查一次如果没有该种动物品系的历史资料时可在试验开

36

),,。,

始时做正常值此后应每隔个月检查一次试验结束时检查一次大鼠每组每性别可检查只非

610

。。

啮齿类动物应全部检查每次检查的动物最好相同

()、()、()、

检查指标主要包括丙氨酸氨基转移酶ALT天门冬氨酸氨基转移酶AST尿素氮BUN肌酐

()、()、()。、()、()、()、()、

Cr白蛋白Alb总蛋白TP如有必要还应做电解质平衡钙Ca磷P氯Cl钠Na钾

()、()()、()。,

K空腹血糖Glu禁食时间要适当碱性磷酸酶ALP与总胆红素在某些情况下还须检测与肝

,、、、()。

或其他器官有关的酶和胆酸以及脂类化合物激素高铁血红蛋白胆碱酯酶ChE活性等分析如出

,。,

现肉眼可见的脏器改变可增加与之相应的血液生化指标还可增加其他脏器相应指标的检查以进一

步对观察到的毒性反应进行研究。

6.6.4大体解剖

,。,

所有动物包括在试验过程中死亡或濒死而被处死的动物均应进行大体解剖如果处死动物处死

。、。

前应收集其血样进行白细胞分类计数保存所有肉眼可见病变肿瘤或可疑肿瘤组织应分析大体解

剖与病理组织学检查结果的对应情况。

ㅤㅤㅤㅤ

。:、、()、、

所有的器官组织都应保存一般包括下列器官和组织脑垂体甲状腺包括甲状旁腺胸腺肺

()、、、、、、、、、、、、、、、、

包括气管心脏主动脉唾液腺肝脾肾肾上腺食管胃十二指肠空肠回肠盲肠结肠直肠

、、、、、、、、、、(,,)、

子宫膀胱淋巴结胰腺性腺生殖附属器官雌性乳腺皮肤肌肉外周神经脊髓颈胸腰段胸

()。。、、、、、。

骨或股骨包括关节和眼睛肺和膀胱用固定剂填充能保存更好脑肝脾肾肾上腺性腺需称重

,。

大鼠每组每性别可称只非啮齿类动物包括甲状腺及甲状旁腺应全部称重

10

6.6.5病理组织学检查

6.6.5.1对所有肉眼可见的肿瘤和异常的组织器官应进行病理组织学检查。

、

6.6.5.2对在试验中途死亡或处死的动物所有高剂量组和对照组动物的组织器官进行病理组织学检

查并详细描述。

,

6.6.5.3试验结果证明某一剂量组的动物正常寿命发生明显改变或诱发了影响毒性反应的效应则下

一个剂量组也应做病理组织学检查。

,

6.6.5.4如果怀疑某种病变是由受试样品引起的则应对所有剂量组动物的相应器官和组织进行病理

组织学检查。

,。

6.6.5.5某一剂量组病理组织学检查有问题时下一剂量组需作病理组织学检查

,

6.6.5.6如高剂量组与对照组病理组织学检查存在明显差别则其他剂量组的相应器官和组织也应进

行病理组织学检查。

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

,、、

可通过表格形式总结试验结果显示试验开始时各组动物数出现毒性反应的动物数毒性反应的

4

/—

GBZT240.252011

。,

类型和动物出现毒性反应的百分比对所有数据应采用适当的统计学方法进行评价统计学方法应在

试验设计时确定。

7.2结果评价

,

慢性毒性试验结果评价应结合前期试验结果综合考虑到毒性效应指标和解剖及病理组织学检查

。、

结果毒性评价应包括受试样品染毒剂量与是否出现毒性反应毒性反应的发生率及其程度之间的关

。、、、、

系这些反应包括行为或临床异常肉眼可见的损伤靶器官体重变化情况死亡效应以及其他一般或

。。

特殊的毒性作用成功的慢性试验应能够提出安全性评价中有意义的NOAEL

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)试验方法;

a

)按性别和剂量的毒性反应数据;

b

)试验期内动物死亡的数量和时间;

c

)毒性作用或其他作用;

d

)每种异常症状出现的时间及其转归情况;

e

)、();

f动物体重资料摄食量和或饮水量资料

)眼科检查结果;

g

)血液学检查结果;

h

)临床生化检查结果;

i

ㅤㅤㅤㅤ

)大体解剖所见;

j

)病理组织学检查所见的详细描述;

k

)对结果进行处理的统计学方法;

l

)确定;

mNOAEL

)结论;

n

)、、;

o进行该试验的实验室的名称和地址试验日期试验和报告负责人

),。

评价报告还应包括所有必要的信息对试验过程和结果评价提供全面而准确的描述应包括

p

、,。

摘要资料分析和结论等摘要应对试验资料以及任何与对照组比较有异常的数据进行概括

9结果解释

,

慢性经皮毒性试验能够提供长期接触受试样品的毒性作用资料为拟定人类接触该受试样品的职

。,。

业接触限值提供依据但由于本试验并不主要研究受试样品的致癌性确定受试样品致癌性仍有限

5