GBZ/T(卫生) 240.22-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第22部分：两代繁殖毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.222011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分两代繁殖毒性试验

22

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part22Two-enerationreroductiontoxicittest

gpy

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.222011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分两代繁殖毒性试验

22

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了动物两代繁殖毒性试验的目的试验概述试验方法数据处理与结果

、。

评价评价报告和结果解释

本部分适用于检测化学品的繁殖毒性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价的程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

/ㅤㅤㅤㅤ。

GBZT240.1界定的术语和定义适用于本文件

3.1

繁殖力的损害imairmentoffertilit

py

表现为雌性或雄性动物生殖功能或能力的障碍。

4试验目的

:、、、

提供关于受试样品对雌性和雄性动物繁殖功能影响的一般性资料如性腺功能交配行为受孕分

、、。(、

娩哺乳断乳以及子代的生长发育情况等同时也可在子代生长发育毒性新生仔缺陷死亡和畸形

),。

等方面取得初步资料为其他有关毒性试验提供参考

5试验概述

。。

试验应设多个剂量组选择生长期中的雌雄动物进行试验染毒期限亲代雄性动物至少为一个完

(),、。

整的精子发生期大鼠约为70d亲代雌性动物至少为两个完整的发情周期及交配期妊娠和哺乳期

,()()。

子代断乳后开始染毒直到交配结束雄性子代以及对子代哺乳结束后雌性子代

FFFF

1121

6试验方法

6.1实验动物

6.1.1动物选择

。。、、、

首选健康初成年的大鼠或小鼠选用繁殖率高的品系所选动物应注明种类品系性别体重和

1

/—

GBZT240.222011

()。

或周龄

6.1.2性别和试验开始时的年龄

,。

为了正确地评价化学品对动物生殖能力的影响两种性别的动物都应使用最常使用周周

7~8

,。。

龄至少经过适应期的动物来进行繁殖毒性试验雌性动物必须是未经产仔的

3d

6.1.3动物数

,(、

为了获得足够的试验数据正确地评价受试样品对两代动物繁殖过程包括亲代动物繁殖妊娠和

,、,子代从出生到断乳的生长发

哺育的过程F子代从出生到成熟过程中的吸乳生长发育情况以及F

12

)。。

育过程可能引起的健康损害效应雄性和雌性动物通常按或的比例合笼交配交配的动

1∶11∶2

物数应保证每个剂量组及对照组都能获得只孕鼠。

20

,,。

孕鼠临近分娩时应单笼饲养在分娩笼中需要时笼中放置造窝垫料

6.2剂量设计

。()

试验至少设三个剂量组和一个对照组应考虑受试样品特性如生物代谢和生物蓄积特性的影响

。,,

作用在受试样品理化和生物特性允许的条件下高剂量应使亲代动物出现明显的毒性反应但不引起

动物死亡;;。

中剂量可引起轻微的毒性反应低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应如果受

试样品的毒性较低,/,,

1000mk体重的剂量仍未对繁殖过程有任何毒副作用则可以采用限量试验

gg

。,,

即试验不需要设其他剂量组若高剂量的预试验观察到明显的母体毒性作用但对生育无影响也可以

采用限量试验。

6.3试验方法

ㅤㅤㅤㅤ

6.3.1染毒途径及方法

,。。整个试验过程中所有的

首选饲料掺入法也可用饮水给予或其他适当的方法给药每周给药7d

。,

动物必须采用相同的给药方式若使用除水外的其他溶剂或介质时这些物质应不会引起任何毒副作

。,。,

用并应设立对照如果染毒的途径为吸入染毒参照有关亚慢性吸入毒性试验对于妊娠期的母鼠给

药量应按妊娠的第天或第天的体重分两阶段计算染毒量。

06

(,)

6.3.2给药期限及繁殖程序以大鼠为例见表1

表大鼠给药期限及繁殖程序

1

试验周期亲代()子一代()子二代()

PFF

12

第第周末给予受试样品

1~8

(),

第第周末交配给药结束后处死雄性鼠

9~11

(),

第第周末妊娠给药出生调整每窝只留只动物

12~148

(),

第第周末哺乳给药结束后处死母乳喂养

15~17

第周基础饲料喂养

18

第第周末给予受试样品

19~26

(),

第第周末交配给药结束后处死雄性鼠

27~29

(),

第第周末妊娠给药出生调整每窝只留只动物

30~328

(),

第第周末哺乳给药结束后处死断乳后处死

33~35

2

/—

GBZT240.222011

6.3.3交配方法及妊娠检查

雄性和雌性动物按或的比例进行交配。

1∶11∶2

,,,

以1∶1的交配方式为例雌鼠应始终与同剂量组的同一只但不是同窝所生的雄鼠合笼直至受孕

。,,

合笼最长时间可为周在交配过程中每天早晨应对雌鼠进行检查查看有无阴栓或阴道中是否有精

3

。()。子代至少应长

子将检查到精子或阴栓的当天计为雌鼠妊娠的第天判为交配成功动物大鼠

0F

1

()。,,

到周后小鼠周才能进行交配交配时从子代每窝中随机选择雌雄各一只与同剂量组中不

911F

1

,。子代在断乳后予以处死。

同窝的动物以1∶1的比例交叉配对繁殖F子代未被选作交配的F

21

,,。

若交配三周后仍未受孕应对不育的动物进行检查分析其原因可以将不育的动物与证实过生育

,、。

功能正常的动物重新配对需要时也可进行生殖器官的病理组织学发情周期和精子发生周期的检查

6.3.4每窝新生幼鼠数量的调整

,,,

代出生后的第天应将仔鼠数尽量随机调整到每窝只雌雄各半否则可作不均等的调整

F48

1

()。,。。

如雄雌每窝的幼仔数小于只时就不需要进行调整子代按同样的方法进行调整

538F

2

6.4观察及检查

。,

6.4.1每日至少对动物进行一次仔细的观察记录有无行为改变难产或滞产以及所有的毒性反应

()。

包括死亡

,,。,

6.4.2在交配前和交配期应计算每周的摄食量和饮水量在妊娠中可考虑逐日记录产仔后每窝仔

,。

鼠需要称量体重时母鼠的摄食量和饮水量也应同时计算

(),。

繁殖试验的动物亲代和子代应在给药的第天进行称重以后每周称量体重一次数据

6.4.3F1

1

ㅤㅤㅤㅤ

。,,,、

应逐只进行记录交配结束时采集亲代雄鼠附睾的精子显微镜下计数200个精子观察其活动性形

状及数量。

。,、

妊娠周期应该从怀孕的第天开始计算生产下的仔鼠应尽早分辨性别记录每窝的出生数

6.4.40

。。

活仔数以及幼仔外观有无异常和畸形同时记录母鼠或仔鼠在生理上和行为上的异常表现

,重应该同一天测量。

6.4.5产仔后哺乳期食物消耗量和窝仔称

、、、。

活仔鼠在出生后的当天上午第天第天第天和第天进行称重

6.4.6471421

6.5大体解剖

,

死亡和到期处死的亲代和成年的子代动物都应解剖进行大体检查肉眼观察有无组织器官形态

F

1

,。,

上的改变特别是生殖器官死亡或濒临死亡的仔鼠也应接受检查查看是否有外观或器官形态的

缺陷。

6.6病理组织学检查

、、、、、、、、

保留上述剖检的所有亲代和子代动物的卵巢子宫子宫颈阴道睾丸附睾精囊前列腺脑

F

1

。

下垂体和靶器官标本先对高剂量组和对照组的动物标本以及剖检中发现异常的标本进行组织病理学

。,。,

检查如高剂量组没有发现有意义的病变其他剂量组的标本可不必再进行病理检查反之若高剂量

,。

组发现有意义的病理改变则其他剂量组相关的标本也应作进一步的检查

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

,、、

7.1.1数据可以用表格进行统计表中应显示每组的实验动物数交配的雄性动物数受孕的雌性动物

/—1

GBZT240.2220111

0

—

2

、。,

数各种毒性反应及其出现动物百分数数据应进行统计分析可采用任何一种适当的统计方法进行

处理。2

2.

7.1.2繁殖指数0

4

———(/);

交配成功率交配成功动物数用于交配的雌性动物数

=×100%2

/

———(/);T

受孕率受孕动物数用于交配的雌性动物数

=×100%

———(/);Z

活产率产生活仔的雌性动物数受孕动物数

=×100%B

———(/);

出生存活率出生后幼仔存活数出生当时存活仔数

=4d×100%G

———(/)。

哺育成活率断奶时幼仔成活数出生后幼仔存活数

=21d4d×100%

7.2结果评价

,,

逐一比较剂量组动物与对照组动物繁殖指数差异是否有显著性以评定受试样品有无繁殖毒性同

(,、),

时还可根据统计学意义出现的指标上如体重观察指标大体解剖和病理组织学检查结果等进一步

评价繁殖毒性的损害作用特点。

8评价报告

/,:

除GBZT240.1中规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)亲代和成年子代动物的摄食量和体重资料;

aF

1

),、;

b按性别和剂量组分别记录的毒性反应包括繁殖妊娠和发育能力的异常

),;

c每窝仔鼠的体重和仔鼠的平均体重以及试验后期单个仔鼠的重量

),ㅤㅤㅤㅤ;

d任何有关繁殖仔鼠及其生长发育的毒性和其他健康损害效应

)观察到的各种异常症状的出现时间和持续过程。

e

9结果解释

。,

本试验可反应动物在多次接触某一受试样品后对繁殖所产生的影响在分析结果时应将其与亚

,,。

慢性试验致畸试验以及其他试验的结果相结合进行综合分析试验结果能提供NOAEL和人体安

,。

全接触水平但试验结果外推到人仍存在着一定的局限性