GBZ/T(卫生) 240.14-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第14部分：啮齿类动物显性致死试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.142011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分啮齿类动物显性致死试验

14

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part14Rodentdominantlethaltest

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.142011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分啮齿类动物显性致死试验

14

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了啮齿类动物显性致死试验的目的试验概述试验方法数据处理与结

、。

果评价评价报告和结果解释

本部分适用于检测化学品对整体啮齿类动物生殖细胞染色体的损伤。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1

显性致死,

dominantlethalDL

。,

引起胚胎或胎儿死亡表明受试样品作用于实验动物的生殖组织一般认为是引起生殖细胞染色

。。

体结构和数量的改变的结果不除外基因突变和毒性作用

3.2

显性致死突变dominantlethalmutation

,,,

发育中的精子或卵子在物理或化学因素作用下发生了染色体损伤从而使受精卵在发育中死亡

,。

并不引起受精障碍但引起受精卵的死亡

4试验目的

,,

本试验是一项生殖细胞致突变试验用来检测整体啮齿类动物生殖细胞染色体畸变以评价受试样

品能否到达性腺组织产生遗传危害。

5试验概述

,,

通过适当的途径使雄性动物接触受试样品然后与未经染毒且未交配过的雌性动物交配交配结束

,。,,,(

后取出雌性动物雌性动物于妊娠后半期处死剖开腹腔取出子宫检查两侧子宫内的植入数着床

)、、。

数早死胎晚死胎和活胎数雄性动物则于一定间隔时间后再与另一批未经染毒且未交配过的雌性

,,()。

动物交配如此共进行数批以保证覆盖一个精子周期周周

6~9

1

/—

GBZT240.142011

6试验方法

6.1受试样品处理

。,。

受试样品一般应新鲜配制如溶液贮存稳定可以不必新鲜配制固体受试样品应溶于或悬于适

,。。

当的溶剂或载体中并进行稀释液体受试样品可直接使用或稀释后使用根据受试样品的理化性质

(/)。

水溶性脂溶性确定受试样品所用的溶剂或载体但所用溶剂或载体在使用剂量水平对实验动物应

,。、、、、

不产生毒作用且不与受试样品发生任何化学反应通常用蒸馏水等渗盐水植物油食用淀粉羧甲

。,。

基纤维素钠等如为非常用的溶剂或载体应有参考资料说明其成分

6.2对照

(),,

6.2.1每次试验都应设置相应的阳性对照和阴性对照溶剂或载体阴性对照除不使用受试样品外

其他处理与受试样品组一致。

(),

6.2.2若近期内一年之内已从试验中获得了有效的阳性对照结果则在同一实验室进行本试验时可

不设阳性对照组。

,:

6.2.3应该使用已被证明在较低剂量水平即对显性致死敏感的阳性对照物常用的阳性对照物有

———环磷酰胺(,号);

cclohoshamideCAS50-18-0

ypp

———单水环磷酰胺(,号);

cclohoshamidemonohdrateCAS6055-19-2

yppy

———三亚乙基嘧胺(,号)

triethlenemelamineCAS51-18-3

y

———甲磺酸乙酯(,号)。

ethlmethanesulhonateCAS62-50-0

yp

。

阴性对照溶剂或载体当所使用的溶剂没有文献资料或历史性资料证明其无有害作用或无致

6.2.4ㅤㅤㅤㅤ

,。

突变性作用时还应设未处理对照组

6.3实验动物和饲养环境

6.3.1实验动物

、、、,

应选用低背景的显性致死率高妊娠率和高植入数健康性成熟的动物品系大鼠和小鼠是本试验

。,。

的常规使用动物经生殖能力预试受孕率应在70%以上小鼠体重30g以上或大鼠体重200g以

,。,(

上动物平均体重变化按性别不能超过雌鼠应为未交配雌鼠且为雄鼠的倍倍量参见

±20%5~6

—)。,,

动物应随机分组每个处理组和对照组雄鼠一般不少于只要求每组每周至

GB15193.3200315

。。

少有只受孕雌鼠动物购回后应适应实验室新环境

303d~5d

6.3.2饲养环境

、。

动物实验室实验动物和动物饲料应符合国家相应规定

6.4剂量设计

,。

6.4.1受试样品至少设三个剂量组应先进行预试验以确定高剂量组高剂量应能使实验动物出现毒

,//。

性症状或繁殖能力轻微降低染毒剂量可选择在110LD~13LD之间中剂量应引起较轻的可观

5050

,。。

察到的毒性效应低剂量应不出现任何毒效应剂量组的剂量间距以倍倍为宜对照组除不接

2~4

,。,。

触受试样品外其他条件应与染毒组完全相同必要时可设介质对照组以研究介质的影响对照组中

。,,

介质的浓度可采用高浓度组的介质用量如染毒后出现严重的中毒症状则应降低受试样品的剂量即

,。

使高剂量组由于浓度的降低导致了其他毒性反应明显下降或消失也应如此

,/,/(·)。

6.4.2受试样品毒性较低时高剂量一次染毒可达5k体重多次染毒可达1kd体重

gggg

2

/—

GBZT240.142011

6.5试验步骤

6.5.1染毒方式与途径

,。。

6.5.1.1雄鼠预先接触受试样品再进行交配雌鼠不接触受试样品

,。

6.5.1.2根据试验目的或受试样品的性质选择染毒途径通常采取经口灌胃或腹腔注射的途径

受试样品溶液一次给予的最大容量不应超过/。

6.5.1.320mLkg

,/、。

一般情况下染毒一次或一次连续

6.5.1.4d5d

6.5.2交配方式

()(),

雄鼠接触受试样品后的当天染毒一次或最后一次接触受试样品后的当天多次染毒按雌雄

∶

,。

鼠或的比例同笼交配于后取出雌鼠另行饲养雄鼠则于后再与同样数量的另一批

1∶12∶15d2d

,。,。

未交配的雌鼠同笼交配如此共进行批批每日检查阴栓或镜检阴道精子确定交配成功

6~9

6.5.3临床观察

主要观察并记录亲代动物的毒性反应。

6.5.4胚胎检查

,,、,

以雌雄鼠同笼日算起第天第天处死雌鼠立即剖腹取出子宫仔细检查计数分别记录每

15~17

、、。

一雌鼠的植入数活胎数早期死亡胚胎数和晚期死亡胚胎数

6.5.5胚胎鉴别

ㅤㅤㅤㅤ

:、,,。

6.5.5.1活胎完整成形色鲜红有自然运动机械刺激后有运动反应

:,,。

6.5.5.2早期死亡胚胎胚胎形体较小外形不完整胎盘较小或不明显最早期死亡胚胎会在子宫内

。,。

膜上隆起如一小瘤如已完全被吸收仅在子宫内膜上留一隆起暗褐色点状物

:、,,。

6.5.5.3晚期死亡胚胎成形色泽暗淡无自然运动机械刺激后无运动反应

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

、。。

应以表格的形式列出雄鼠数孕鼠数和未受孕雌鼠数应分别记录每次每对雌雄鼠交配的情况

,、

对每只雌鼠而言还应详细记录其交配周次与之交配的雄鼠接触受试样品的剂量以及活胎率和死胎率

情况。

,。

以受试样品组的雄鼠为单位分别计算每周的下列各项指标

每组孕鼠数

平均受孕率=×100%

每组同笼雌鼠总数

总着床数活胎数早期胚胎死亡数晚期胚胎死亡数

=++

每组总着床数

平均着床数=

每组受孕雌鼠数

每组早期胚胎死亡数

早期胚胎死亡率=×100%

每组总着床数

每组晚期胚胎死亡数

晚期胚胎死亡率=×100%

每组总着床数

每组早期胚胎死亡数

平均早期胚胎死亡数=

每组受孕雌鼠数

/—1

GBZT240.1420111

0

—

2

按受试样品组与对照组动物的上述指标分别用适当的统计分析方法进行分析。

4

7.2结果评价1.

0

4

;

受试样品组动物受孕率或着床数明显低于阴性对照组早期或晚期胚胎死亡率明显高于阴性对照2

/

T

,,。,

组并有明显的剂量反应关系和统计学意义时即可确认为阳性结果若统计学上差异有显著性但无

-

Z

,,。

剂量反应关系则须进行重复试验结果能重复者可确定为阳性显性致死阳性表明在试验条件下受

-B

试样品对所用动物的生殖细胞具有遗传毒性。G

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般的项目外评价报告还应包括以下内容

),()、

a剂量分组及选择剂量的基本原则阳性和阴性对照资料包括当前和历史的资料染毒途径和

方式;

):,,;

b试验方法简述操作步骤所用统计学方法结果判定标准

):、、、、、

c结果中毒症状每周每组总着床数平均着床数平均受孕率早期胚胎死亡率晚期胚胎死亡

,、、

率和平均早期胚胎死亡数剂量反应关系阴性对照的参考资料及历史资料阳性对照的参考

-

资料等。

9结果解释

ㅤㅤㅤㅤ

。

阳性结果表明在本试验条件下受试样品对实验动物的生殖细胞具有遗传毒性阴性结果表明在本

试验条件下受试样品对实验动物生殖细胞无遗传毒性。