YY/T 0127.18-2016 口腔医疗器械生物学评价 第18部分：牙本质屏障细胞毒性试验

ICS11.060.10

C33

中华人民共和国医药行业标准

/—

YYT0127.182016

口腔医疗器械生物学评价

:

第部分牙本质屏障细胞毒性试验

18

ㅤㅤㅤㅤ

Bioloicalevaluationofmedicaldevicesusedindentistr

gy

:

Part18Dentinebarrierctotoxicittest

yy

2016-01-26发布2017-01-01实施

国家食品药品监督管理总局发布

/—

YYT0127.182016

口腔医疗器械生物学评价

:

第部分牙本质屏障细胞毒性试验

18

1范围

/的本部分规定了口腔材料牙本质屏障细胞毒性试验方法。

YYT0127

本部分适用于评价牙体充填材料和牙齿窝洞治疗的相关材料及其可滤沥成分经牙本质屏障后对细

胞毒性的影响。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/:(/—,

医疗器械生物学评价第部分体外细胞毒性试验

GBT16886.55GBT16886.52003

:,)

ISO10993-51999IDT

/:(/—

医疗器械生物学评价第部分样品制备与参照样品

GBT16886.1212GBT16886.12

,:)

2005ISO10993-122002

:—ㅤㅤㅤㅤitofmedicaldevicesusedinden-

ISO7405-AMD2013DentistrEvaluationofbiocomatibily

yp

()

牙科学用于口腔的医疗器械生物相容性评价

tistr

y

3目的

,。

本试验用于通过细胞培养的方法评价牙体充填材料的细胞毒性细胞和材料被一个牙本质屏障

,。

分隔开从而模拟临床牙齿窝洞用修复材料充填的情况

,。

如果采用琼脂覆盖法或滤膜滤过法所得细胞毒性为0~1级时则不必进行该试验

4器具和材料

4.1细胞

,()[

使用已建立细胞系的细胞例如来自ATCCAmericanTeCultureCollection如ATCCCCL1

yp

()],

小鼠成纤维细胞或者选择克隆大抗原基因转染的细胞例如来源于小牛

NCTCclone929SV40T

。()、。

牙乳头的细胞细胞应保持在温度为含的潮湿空气的生长培养基中也可以使用

37±2℃5%CO2

其他拥有类似成牙本质细胞性质的或其他具有与牙髓组织生理相关性质的已经建立细胞系的细胞。

4.2培养基

培养基应适宜所选细胞系,。

例如由ATCC或类似机构提供

:://。

注可参见的指导克隆大抗原基因转染细胞的生长培养基包含添加

HTTPWWW.ATCC.ORGSV40T20%

胎牛血清()的、/青霉素、/链霉素、/两性霉素和/遗传

FBSMEMα150IUmL150μgmL0.125μgmLB0.1mgmL

霉素。

1

/—

YYT0127.182016

4.3试剂

四唑盐()[(,),]

4.3.1MTT3-45-dimethlthiazol-2-l-25-dihenltetrazoliumbromide

yypy

/

4.3.2抗菌素抗真菌剂

、、()。

青霉素链霉素两性霉素和遗传霉素遗传霉素仅适用于克隆转染细胞

BSV40

4.4设备和器具

4.4.1培养皿

[1)]。

插入式细胞培养皿例如Millicell

4.4.2培养板

6孔、孔、孔和孔培养板。

244896

4.4.3三维细胞培养网

2)

[],,,

如直径8mm聚酰胺网例如Sefar或三维网状支架宽网150m~200m纤维直径150m

μμμ

厚0.6mm。

4.4.4分隔小室灌注器具

()3)4)()或其他合适的灌注小室。

分隔灌注小室简称灌注小室可以是或图

3DBioreactorMinucells1

ㅤㅤㅤㅤ

3)

,,。灌注

3DBioreactor灌注小室是一个由聚碳酸酯制成的圆柱形空腔其内径约6mm高约20mm小

(“”,“”),

室被一片牙本质片分隔成上下两个腔上腔即窝洞下腔即牙髓腔牙本质片被固定在合适的位置

()。3)“”,

图23DBioreactor装置的牙髓腔部分一侧入口与提供培养基的瓶子相连另一侧出口与一个转

,。“”

动的泵相连该泵与回收废培养基的瓶子相连或者此装置的牙髓腔部分一侧入口与提供培养基的

,。

瓶子和一个转动的泵相连另一侧出口与回收废培养基的瓶子相连

),,。,

1是产品的商品名此信息是给本部分用户提供方便不代表我们认可其产

MillicellMillioreBillerciaUSA

p

。,。

品用户可以使用其他类似的产品只要它们可以达到相同的结果

),/,。,

是产品的商品名此信息是给本部分用户提供方便不代表我们认可其

2SefarSefarWasserburInnGerman

gy

。,。

产品用户可以使用其他类似的产品只要它们可以达到相同的结果

),,。,

是产品的商品名此信息是给本部分用户提供方便不代表我们认

33DBioreactor3DBiotekNewJerseUSA

y

。,。

可其产品用户可以使用其他类似的产品只要它们可以达到相同的结果

),。

4Minucells是德国BadAbbachMinucells&MinutissueGmbH公司产品的商品名此信息是给本部分用户提

,。,相同的结果。

供方便不代表我们认可其产品用户可以使用其他类似的产品只要它们可以达到

2

/—

YYT0127.182016

说明:

———培养基的供应;

1

2———加热板或合适装置以保证细胞在适宜环境里生长;

3———灌注小室;

———;

4泵

———废液瓶。

5

图1牙本质屏障细胞毒性试验装置示意图

ㅤㅤㅤㅤ

说明:

———试验材料;

1

2———有细胞的网子;

3———牙本质片;

4———不锈钢或合适材料制成的小室壁;

———不锈钢或合适材料制成的固定牙本质片的支架。

5

图2固定牙本质片的支架和细胞培养灌注小室示意图

4.4.5酶标仪

,,。

96孔板波长540nm或者任何其他适合的光度计

4.4.6牙本质片

来自于人或者牛的牙本质。

:,,

注如果使用非人源牙本质使用前应先确定牙本质的通透性以确保其通透性与人牙牙本质的牙髓牙本质界面处

-

5)

。。