YY/T 0127.10-2009 口腔医疗器械生物学评价 第2单元：试验方法 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验(Ames试验)

犐犆犛１１．０６０．１０

犆３３

中华人民共和国医疗行业标准

／—

犢犢犜０１２７．１０２００９

代替／—

ＹＹＴ０１２７．１０２００１

口腔医疗器械生物学评价

第单元：试验方法

２

ㅤㅤㅤㅤ

鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验

（试验）

犃犿犲狊

犅犻狅犾狅犻犮犪犾犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀狅犳犿犲犱犻犮犪犾犱犲狏犻犮犲狊狌狊犲犱犻狀犱犲狀狋犻狊狋狉—

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（）

犃犿犲狊犿狌狋犪犲狀犻犮犻狋狋犲狊狋

犵狔

２００９０６１６发布２０１０１２０１实施

国家食品药品监督管理局发布

／—

犢犢犜０１２７．１０２００９

口腔医疗器械生物学评价

第单元：试验方法

２

鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验

（试验）

犃犿犲狊

１范围

／的本部分规定了口腔医疗器械鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验方法。

ＹＹＴ０１２７

本试验用于测定可引起沙门氏杆菌基因置换和／或移码突变的口腔材料所诱发的依赖于组氨酸

（）的菌株产生不依赖于组氨酸（）的基因突变。为检测口腔医疗器械的诱变性试验之一。

ｈｉｓ－ｈｉｓ＋

２规范性引用文件

下列文件中的条款通过／的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文

ＹＹＴ０１２７

件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成

协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本

部分。

—化妆品安全性评价程序和方法

ＧＢ７９１９１９８７

ㅤㅤㅤㅤ

—鼠伤寒沙门氏菌／哺乳动物微粒体酶试验

ＧＢ１５１９３．４２００３

／医疗器械生物学评价第部分：样品制备与参照样品（／—

ＧＢＴ１６８８６．１２１２ＧＢＴ１６８８６．１２

，：，）

２００５ＩＳＯ１０９９３．１２２００２ＩＤＴ

３仪器

３．１实验室常用设备。

３．２洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴，低温高速离心机，低温冰箱（－８０℃）或液氮罐等。

４培养基和试剂的制备

培养基和试剂的制备见附录。

Ａ

５菌株准备、鉴定和贮藏

５．１菌株

采用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌共四株———、、、。

ＴＡ９７ＴＡ９８ＴＡ１００ＴＡ１０２

５．２菌株贮存

菌株贮存在加有二甲基亚砜的（光谱纯）新鲜细菌培养液中，其体积比为０．０９∶１，混合后分装于小

试管或菌种管内，经干冰丙酮液（－７５℃）或液氮（－１９６℃）速冻，在－８０℃冰箱或－１９６℃液氮中长期

贮存。

５．３增菌培养

从冷冻贮存菌株管中刮取细菌置营养肉汤培养基中，经振荡（次／）培养

５ｍＬ３７℃１００ｍｉｎ１０ｈ～

，活菌数应达９／（）。细菌培养液从取出后，应立即放入中备用。试验需

１２ｈ１０ｍＬＯＤ６０００．４３７℃４℃

≈

用当天孵育好的新鲜细菌。

１

／—

犢犢犜０１２７．１０２００９

５．４菌株鉴定

组氨酸需求（）试验

５．４．１犺犻狊－

凡组氨酸营养缺陷型试验菌株只能在补充组氨酸的培养基上生长，而在缺乏组氨酸的培养基上不

能生长。

鉴定方法：在底层培养基平皿表面加入／组氨酸和／生物素

０．５ｍｍｏｌＬＬ０．１ｍＬ０．５ｍｍｏｌＬＤ

。用棒铺开。对照平皿只加生物素不加组氨酸。用白金耳浸细菌培养液，在对照平皿和含有

０．１ｍＬＬ

组氨酸／生物素的平皿表面分别平行划线。四株细菌可划在同一个平皿上，经３７℃孵育２４ｈ后，观察

细菌生长情况。试验菌株在含组氨酸平皿上生长，在对照平皿上不应生长。

脂多糖屏障缺陷鉴定（突变）

５．４．２狉犳犪

粗糙型突变的微生物，其细胞表面一层脂多糖屏障已经破坏，因此一些大分子物质能穿过菌膜进入

菌体内而抑制其生长。野生型菌株或含缺失的菌株则不受影响。

ｇａｌ

鉴定方法：分别将每种细菌培养液０．１ｍＬ加到４５℃２ｍＬ顶层培养基试管内，混匀后倾倒于营养

琼脂培养基平皿表面，使其均匀分布。待固化后，取直径为无菌滤纸圆片浸／结晶紫溶

６ｍｍ１ｍｍＬ

ｇ

液１０Ｌ，放到平皿中央。经３７℃孵育２４ｈ后，围绕圆纸片出现透明的抑菌环（直径大约１４ｍｍ），说明

μ

此菌存在深粗型（）突变。、、、均有抑菌环。野生型鼠伤寒杆菌无抑菌环。

ｒｆａＴＡ９７ＴＡ９８ＴＡ１００ＴＡ１０２

对紫外线敏感性鉴定（修复缺陷型的鉴定）

５．４．３狌狏狉犅

具有ｕｖｒＢ修复缺陷型的试验菌株，在紫外线照射后仍能照常生长，借此证明ｕｖｒＢ突变的存在。

鉴定方法：用白金耳浸细菌培养液，在营养琼脂培养基平皿表面平行划线，四株细菌可划在同一平

皿上。用黑纸覆盖平皿一半，在距离处用紫外线杀菌灯照射平皿，经孵育后

３３ｃｍ１５Ｗ８ｓ３７℃２４ｈ

观察结果。对紫外线敏感的菌株（、、）只在未照射过的一半平皿上生长。而具有

ＴＡ９７ＴＡ９８ＴＡ１００

修复缺陷型的菌株（）在紫外线照射（未盖黑纸的另一半平皿）后仍能生长。

ｕｖｒＢＴＡ１０２

ㅤㅤㅤㅤ

抗氨苄青霉素（）试验（菌株因子丢失鉴定）

５．４．４犘犓犕１０１犚

含因子的试验菌株对氨苄青霉素具有抗性。因子不稳定容易丢失，从而使试验菌株丧失因

ＲＲＲ

子的特性，故需鉴定因子是否存在。

Ｒ

鉴定方法：用白金耳浸细菌培养液，在含氨苄青霉素平皿表面平行划线，四株细菌可划在同一平

１

皿上。还应选用一个无抗性因子的菌株，以测定氨苄青霉素的效应。经３７℃孵育２４ｈ后，无抗性因子

菌株不应生长。

鉴定方法：用白金耳浸细菌培养液，在营养琼脂培养基平皿表面