GB 5413.26-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定

中华人民共和国国家标准

GB5413.26—2010

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定

Nationalfoodsafetystandard

Determinationoftaurineinfoodsforinfantsandyoungchildren,

milkandmilkproducts

2010-03-26发布2010-06-01实施

中华人民共和国卫生部发布

GB5413.26—2010

前言

本标准第二法等同采用国际分析家学会（AOAC）AOAC997.05Taurineinpowderedmilkand

powderedinfantformulae。

本标准代替GB/T5413.26-1997《婴幼儿食品和乳粉牛磺酸的测定》。

本标准与GB/T5413.26-1997相比，主要变化如下：

——将原标准方法OPA柱后衍生高效液相色谱法定为第一法；

——增加单磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法为第二法；

——对原标准的结构进行了修改。

——外标法定量采用标准曲线法；

——增加附录A标样的液相色谱图。

本标准附录A为资料性附录。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——GB5413-1985、GB/T5413.26-1997。

I

GB5413.26—2010

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定

1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定。

2规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

第一法OPA柱后衍生法

3原理

样品用偏磷酸溶液溶解，经超声波振荡提取、离心、微孔滤膜过滤后，通过钠离子色谱柱分离，与

邻苯二甲醛（OPA）衍生反应，用荧光检测器进行检测，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1偏磷酸（HPO3）。

4.2柠檬酸三钠(NaCHO·2HO)。

36572

4.3苯酚(CHO)。

66

4.4硝酸(HNO3)。

4.5甲醇(CH3OH)：色谱纯。

4.6硼酸(HBO)。

33

4.7氢氧化钾(KOH)。

4.8邻苯二甲醛(CHO)（OPA）。

862

4.92-巯基乙醇(CHOS)。

26

4.10聚氧乙烯月桂酸醚（Brij-35）。

4.11牛磺酸标准品：纯度≥99%。

4.12偏磷酸溶液（10g/L）：称取10.0g偏磷酸（4.1），用水溶解并定容至1000mL。

1

GB5413.26—2010

4.13柠檬酸缓冲液：称取19.6g柠檬酸三钠（4.2），加950mL水溶解，加入1mL苯酚（4.3），用

硝酸（4.4）调pH值至3.10～3.25，经0.45μm微孔滤膜过滤。

4.14柱后荧光衍生溶剂（邻苯二甲醛溶液）

4.14.1硼酸钾溶液（0.5mol/L）：称取30.9g硼酸（4.6），26.3g氢氧化钾（4.7），用水溶解并定

容至1000mL。

4.14.2邻苯二甲醛衍生溶液：称取0.60g邻苯二甲醛（4.8），用10mL甲醇（4.5）溶解后，加入0.5

mL2-巯基乙醇（4.9）和0.35gBrij-35（4.10），用0.5mol/L的硼酸钾溶液（4.14.1）定容至1000mL，

经0.45μm微孔滤膜过滤。临用前配制。

4.15牛磺酸标准溶液

4.15.1牛磺酸标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取0.1000g牛磺酸标准品（4.11），用水溶解并定容

至100mL。储备液在4℃下可保存7天。

4.15.2牛磺酸标准工作液：将牛磺酸标准储备液（4.15.1）用水稀释制备一系列标准溶液，标准系列

浓度为：0、5、10、15、20μg/mL。临用前配制。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪，带有荧光检测器。

5.2柱后反应器。

5.3荧光衍生溶剂输液泵。

5.4超声波振荡器。

5.5pH计：精度为0.01。

5.6离心机：转速≥5000转/分钟。

5.70.45μm微孔滤膜。

5.8天平：感量为1mg，0.1mg。

6分析步骤

6.1试样的处理

准确称取固体样品1g～5g试样，液体样品5g～20g（精确至0.01g，试样中含牛磺酸5μg以上），

加30mL偏磷酸溶液（4.12）溶解，充分摇匀，移入100mL容量瓶中；放入超声波振荡器中振荡10min～

15min，取出冷却至室温后，用水定容至刻度；样液在5000转/分钟条件下离心10min，取上清液经0.45

μm微孔膜（5.7）过滤，接取中间滤液以备进样。

6.2测定

6.2.1参考色谱条件

色谱柱：钠离子氨基酸分析专用柱（250mm×4.6mm）或同等性能的色谱柱。

流动相：柠檬酸缓冲液（4.13）。

流动相流速：0.30mL/min。

2

GB5413.26—2010

荧光衍生溶剂流速：0.30mL/min。

柱温：55℃。

检测波长：激发波长：338nm，发射波长：425nm。

进样量：20μL。

6.2.2标准曲线绘制

将牛磺酸标准系列工作液（4.15.2）依次经衍生后按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，

色谱图参见附录A。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

6.2.3试液测定

将试液按上述推荐色谱条件上机测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。

7分析结果的表述

7.1结果计算

c×V×100

X………………………(1)

m×1000

式中：

X——试样中牛磺酸的含量，单位为毫克/100克（mg/100g）；

c——试液的进样浓度，单位为微克/毫升（μg/mL）；

V——试样定容容积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）。

7.2结果表示

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

第二法单磺酰氯柱前衍生法

9原理

样品用水溶解，用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。取上清液用丹磺酰氯衍生反应，衍生物经C18

反相色谱柱分离，用紫外检测器（波长254nm）或荧光检测器（激发波长330nm，发射波长530nm）

检测，外标法定量。

10试剂和材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

10.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

10.2冰乙酸（CH3COOH）。

10.3盐酸。

10.4无水碳酸钠（NaCO）。

23

3

GB5413.26—2010

10.5亚铁氰化钾[KFe(CN)]。

46

10.6乙酸锌[Zn(CHCOO)]。

32

10.7乙酸钠[Na(CH3COO)]。

10.8盐酸甲胺（甲胺盐酸盐）（CH3NH2·HCl）。

10.9丹磺酰氯（5-二甲氨基萘-1-磺酰氯）：色谱纯。

注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定。

10.10牛磺酸标准品：纯度≥99%。

10.11盐酸（1mol/L）：吸取9mL盐酸（10.3），用水稀释并定容到100mL。

10.12沉淀剂

10.12.1沉淀剂Ⅰ：称取15.0g亚铁氰化钾（10.5），用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3

个月内稳定。

10.12.2沉淀剂Ⅱ：称取30.0g乙酸锌（10.6），用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3个

月内保持稳定。

10.13碳酸钠缓冲液（pH9.5）（80mmol/L）：称取0.424g无水碳酸钠（10.4）