GB 5413.20-2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

中华人民共和国国家标准

GB5413.20—2013

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

2013-11-29发布2014-06-01实施

GB5413.20—2013

前言

本标准代替GB/T5413.20—1997《婴幼儿配方食品和乳粉胆碱的测定》。

本标准与GB/T5413.20—1997相比，主要变化如下：

——修改了标准的名称；

——修改了用于酶反应的显色剂成分；

——增加了第二法雷氏盐分光光度法。

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GB5413.20—2013

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定

1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。

第一法酶比色法

2原理

试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质，其颜色

的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。

3试剂和材料

注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

3.1试剂

3.1.1三羟甲基氨基甲烷[(CHOH)CNH]。

232

3.1.2苯酚(CHOH)。

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3.1.3浓盐酸(HCl)。

3.1.4氢氧化钠(NaOH)。

3.1.5胆碱氧化酶：置于-20℃保存。

3.1.6过氧化物酶：置于2℃~8℃保存。

3.1.74-氨基安替比林(CHNO)。

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3.1.8磷脂酶D：置于-20℃保存。

3.2试剂配制

3.2.1盐酸(1mol/L)：量取85mL浓盐酸加水稀释至1000mL。

3.2.2盐酸(3mol/L)：量取125mL浓盐酸加水稀释至500mL。

3.2.3Tris缓冲溶液（0.05mol/L）：pH=8.0±0.2。

称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶入500mL蒸馏水中，用1mol/L盐酸调pH至8.0±0.2，用蒸馏水定

容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。

3.2.4用于酶反应的显色剂：取100~120活力单位的胆碱氧化酶、250~280活力单位的过氧化物酶、

75个~100个活力单位的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林，50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05

mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。临用时配制。

3.2.5氢氧化钠溶液(500g/L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000mL。

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GB5413.20—2013

3.3标准品

胆碱酒石酸氢盐标准品（CHNO）：纯度≥99%。

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3.4标准溶液配制

3.4.1胆碱氢氧化物标准贮备溶液（2.5mg/mL）：称取在102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523

mg置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。冷藏于4℃±2℃冰箱中，保存不超过1周。

3.4.2胆碱氢氧化物标准工作溶液（250µg/mL）：吸取10.0mL标准贮备溶液于100mL容量瓶中，

用水稀释至刻度。临用时配制。

4仪器和设备

4.1天平：感量为0.01g和0.1mg。

4.2恒温水浴锅：温度可控制在70℃±2℃和37℃±2℃。

4.3pH计：精度0.01。

4.4分光光度计。

5分析步骤

5.1试样制备

5.1.1固体试样

称取5g（精确到0.01g）混合均匀的试样，于100mL的锥形瓶中，加入30mL盐酸溶液（3.2.1）。

5.1.2液体试样

称取20g（精确到0.01g）混合均匀的试样，于100mL的锥形瓶中，加入10mL盐酸溶液（3.2.2）。

5.1.3水解

将装有试样的容器放在70℃水浴中，加塞混匀，水解3h（每隔30min振摇一次），冷却。用氢

氧化钠溶液调pH为3.5～4.0，转入50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

5.1.4过滤

过滤水解液（5.1.3）。滤液应是澄清的，否则，用0.45μm的滤膜再次过滤。滤液放在4℃的冰箱

中可以保存3d。

5.2测定

5.2.1