GB 4789.3-2025 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数

中华人民共和国国家标准

GB47893—2025

.

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

2025-03-16发布2025-09-16实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

国家市场监督管理总局

GB47893—2025

.

前言

本标准代替食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数

GB4789.3—2016《》。

本标准与相比主要变化如下

GB4789.3—2016,:

删除了检验原理

———;

修改了术语和定义

———;

修改了设备和材料培养基和试剂

———、;

修改了检验程序操作步骤结果与报告和附录

———、、。

1

GB47893—2025

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食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

1范围

本标准规定了食品中大肠菌群计数的方法

(Coliforms)。

本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数第二法适用于大肠菌群含量较

,

高的食品中大肠菌群的计数

。

2术语和定义

21大肠菌群coliforms

.

在一定培养条件下能发酵乳糖产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌

、。

22MPN法mostprobablenumberMPNtechnique

.()

统计学和微生物学结合的一种定量检测法待测样品经系列稀释并培养后根据其未生长的最低

。,

稀释度与生长的最高稀释度应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最可能数

,。

3设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

,。

31恒温培养箱

.:36℃±1℃、30℃±1℃。

32冰箱

.:2℃~8℃。

33恒温装置

.:48℃±2℃。

34天平感量

.:0.1g。

35均质器及无菌均质袋均质杯振荡器

.、,。

36试管或其他合适规格以及小倒管杜氏管或其他合适的产

.:15mm×150mm、18mm×180mm,()

气收集装置

。

37无菌吸管具刻度具刻度具刻度具

.:1mL(0.01mL)、2mL(0.02mL)、5mL(0.05mL)、10mL(

刻度或微量移液器及无菌吸头

0.1mL)。

38无菌锥形瓶容量

.:500mL。

39无菌培养皿直径

.:90mm。

310计或精密试纸

.pHpH。

311无菌接种环直径约

.:10μL(3mm)。

312放大镜或菌落计数器

.。

4培养基和试剂

41磷酸盐缓冲液见附录中

.:AA.1。

42生理盐水见

.:A.2。

1

GB47893—2025

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43月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤见

.(LST):A.3。

44煌绿乳糖胆盐肉汤见

.(BGLB):A.4。

45结晶紫中性红胆盐琼脂见

.(VRBA):A.5。

46见

.1mol/LNaOH:A.6。

47见

.1mol/LHCl:A.7。

48大肠菌群计数测试片应以发酵乳糖产酸产气为阳性结果判断依据且性能符合中相

.(,GB4789.28

关培养基的质量要求

)。

第一法大肠菌群MPN计数法

5检验程序

大肠菌群计数法的检验程序见图

MPN1。

图1大肠菌群MPN计数法检验程序

6操作步骤

61样品的稀释

.

611固体和半固体样品无菌操作称取样品放入盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的无

..:25g,225mL

菌均质杯内均质或放入盛有磷酸盐缓冲液或生理

,8000r/min~10000r/min1min~2min;225mL

盐水的无菌均质袋中用拍击式均质器拍打制成的样品匀液

,1min~2min,1∶10。

2

GB47893—2025

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612液体样品用无菌吸管吸取样品置于盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形

..:25mL225mL

瓶瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠中充分混匀或放入盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的

(),225mL

无菌均质袋中用拍击式均质器拍打制成的样品匀液当样品不适宜进行体积取

,1min~2min,1∶10。

样时按操作

,6.1.1。

613必要时用或调节样品匀液或液体样品原液的至

..1mol/LNaOH1mol/LHCl,pH6.5~7.5

之间

。

614用无菌吸管或微量移液器吸取样品匀液沿管壁缓缓注入装有磷酸盐缓冲液

..1∶101mL,9mL

或生理盐水的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面将试管在振荡器上振荡混匀制成

(),,

的样品匀液

1∶100。

615根据对样品污染状况的估计参照的操作依次制成倍递增系列稀释样品匀液每递

..,6.1.4,10。

增稀释次换用支无菌吸管或吸头

1,1。

62初发酵试验

.

每个样品选择个适宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以选择原液每个稀释度接种管

,3(),3

肉汤每管肉汤接种样品匀液如接种体积超过则加到等体积的双料肉汤

LST,LST1mL(1mL,LST

中从制备样品匀液开始至接种到肉汤完毕全过程不得超过将已接种样品的肉

)。LST,15min。LST

汤管置于培养检查产气情况小倒管或产气收集装置内有气泡产生或轻轻振

36℃±1℃24h±2h,。,

摇肉汤管可见试管内有细密气泡不断上升者判断为产气产气者进行复发酵试验确认试验

LST,,()。

如未产气则继续培养至再检查产气情况产气者进行复发酵试验培养至仍未产

48h±2h,;48h±2h,

气者判断为大肠菌群阴性若培养至所有肉汤管均未产气按照附录中的检

。48h±2h,LST,BMPN

索表报告每克毫升样品中大肠菌群的值以表示

,()MPN,MPN/g(mL)。

63复发酵试验确认试验

.()

轻轻振摇各产气的肉汤管分别用接种环取培养物环转种于肉汤管中

LST,1,BGLB,36℃±1℃

培养检查产气情况产气者判断为大肠菌群阳性未产气者则继续培养至再检查

24h±2h,,;48h±2h

产气情况产气者判断为大肠菌群阳性仍未产气者判断为大肠菌群阴性

,,。

7结果与报告

根据复发酵试验中个适宜连续稀释度中大肠菌群阳性的管数如连续的稀释度超过个根据附

3(3,

录确定最适的个连续稀释度按照附录中的检索表报告每克毫升样品中大肠菌群的

C3),BMPN,()

值以表示

MPN,MPN/g(mL)。

第二法大肠菌群平板计数法

8检验程序

大肠菌群平板计数法的检验程序见图

2。

3

GB47893—2025

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图2大肠菌群平板计数法检验程序

9操作步骤

91样品的稀释

.

按进行

6.1。

92接种与培养

.

921根据对样品污染状况的估计选取个个适宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以选择

..,2~3(

原液每个稀释度接种个无菌培养皿每皿同时取磷酸盐缓冲液或生理盐水加入个无菌培

),2,1mL。2

养皿作空白对照每皿

,1mL。

922尽快将冷却至的倾注于培养皿中每皿小心旋转培养皿

..48℃±2℃VRBA,15mL~20mL。,

将培养基与接种的样品匀液充分混匀水平静置待其凝固从制备样品匀液开始至倾注完毕

,。VRBA,

全过程不得超过琼脂凝固后再均匀覆盖至整个平板表面覆层的琼脂

15min。,3mL~4mLVRBA。

凝固后翻转平板置于培养对于乳及乳制品应置于培养

,36℃±1℃18h~24h。,30℃±1℃18h~

24h。

923若采用大肠菌群计数测试片则按其说明进行操作

..,。

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