GB 4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验

中华人民共和国国家标准

GB4789.9—2014

食品安全国家标准

食品微生物学检验空肠弯曲菌检验

2014-12-01发布2015-05-01实施

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GB4789.9—2014

前言

本标准代替GB/T4789.9-2008《食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验》。

本标准与GB/T4789.9-2008相比，主要变化如下：

——修改了标准的中文名称；

——修改了范围；

——修改了设备和材料；

——修改了培养基和试剂；

——修改了样品处理；

——删除了药物敏感性试验；

——删除了第二法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法。

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GB4789.9—2014

食品安全国家标准

食品微生物学检验空肠弯曲菌检验

1范围

本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）的检验方法。

本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：25℃±1℃、36℃±1℃、42℃±1℃；

b)冰箱：2℃～5℃；

c)恒温振荡培养箱：36℃±1℃、42℃±1℃；

d)天平：感量0.1g；

e)均质器与配套均质袋；

f)振荡器；

g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

h)无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000mL；

i)无菌培养皿：直径90mm；

j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；

k)水浴装置：36℃±1℃、100℃；

l)微需氧培养装置：提供微需氧条件（5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气）；

m)过滤装置及滤膜（0.22μm、0.45μm）；

n)显微镜：10倍～100倍，有相差功能；

o)离心机：离心速度≥20000g；

p)比浊仪；

q)微生物生化鉴定系统。

3培养基和试剂

3.1Bolton肉汤（Boltonbroth）：见附录A中A.1。

3.2改良CCD琼脂（modifiedCharcoalCefoperazoneDeoxycholateAgar,mCCDA）：见附录A中A.2。

3.3哥伦比亚血琼脂（Columbiabloodagar）：见附录A中A.3。

3.4布氏肉汤（Brucellabroth）：见附录A中A.4。

3.5氧化酶试剂：见附录A中A.5。

3.6马尿酸钠水解试剂：见附录A中A.6。

3.7Skirrow血琼脂（Skirrowbloodagar）：见附录A中A.7。

3.8吲哚乙酸酯纸片：见附录A中A.8。

3.90.1%蛋白胨水：见附录A中A.9。

3.101mol/L硫代硫酸钠（NaSO）溶液：见附录A中A.10。

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3.113%过氧化氢（HO）溶液：见附录A中A.11。

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3.12空肠弯曲菌显色培养基。

3.13生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。

4检验程序

空肠弯曲菌检验程序见图1。

样品处理

Bolton肉汤预增菌，微需氧

36℃±1℃4h

Bolton肉汤增菌，微需氧

42℃±1℃24h～48h

接种Skirrow与mCCD琼脂平板，或显色培养基

42℃±1℃24h～48h

挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板

42℃±1℃24h～48h

镜检动力氧化酶微需氧25℃±1℃有氧42℃±1℃

试验试验生长试验生长试验

弯曲菌属

过氧化氢酶马尿酸钠吲哚乙酸酯水

试验水解试验解试验

空肠弯曲菌

报告

图1空肠弯曲菌检验程序

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5操作步骤

5.1样品处理

5.1.1一般样品

取25g（mL)样品（水果、蔬菜、水产品为50g）加入盛有225mLBolton肉汤的有滤网的均质袋

中（若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤），用拍击式均质器均质1min～2min，经滤网或无菌纱布过

滤，将滤过液进行培养。

5.1.2整禽等样品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部，并振荡2min～3min，经无菌纱布过滤至250

mL离心管中，16000g离心15min后弃去上清，用10mL0.1%蛋白胨水悬浮沉淀，吸取3mL于100mL

Bolton肉汤中进行培养。

5.1.3贝类

取至少12个带壳样品，除去外壳后将所有内容物放到均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min，

取25g样品至225mLBolton肉汤中（1:10稀释），充分震荡后再转移25mL于225mLBolton肉汤中（1:100

稀释），将1:10和1:100稀释的Bolton肉汤同时进行培养。

5.1.4蛋黄液或蛋浆

取25g（mL)样品于125mLBolton肉汤中并混匀（1:6稀释），再转移25mL于100mLBolton肉

汤中并混匀（1:30稀释），同时将1:6和1:30稀释的Bolton肉汤进行培养。

5.1.5鲜乳、冰淇淋、奶酪等

若为液体乳制品取50g；若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中，

用拍击式均质器均质15s～30s，保留过滤液。必要时调整pH值至7.5±0.2，将液体乳制品或滤过液以

20000g离心30min后弃去上清，用10mLBolton肉汤悬浮沉淀（尽量避免带入油层），再转移至90mL

Bolton肉汤进行培养。

5.1.6需表面涂拭检测的样品

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无菌棉签擦拭检测样品的表面（面积至少100cm以上），将棉签头剪落到100mLBolton肉汤中进

行培养。

5.1.7水样

将4L的水（对于氯处理的水，在过滤前每升水中加入5mL1mol/L硫代硫酸钠溶液）经0.45μm

滤膜过滤，把滤膜浸没在100mLBolton肉汤中进行培养。

5.2预增菌与增菌

在微需氧条件下，36℃±1℃培养4h，如条件允许配以100r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌

液的pH值并调整至7.4±0.2，42℃±1℃继续培养24h～48h。

5.3分离

将24h增菌液、48h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于Skirrow血琼脂与mCCDA琼脂平

板上，微需氧条件下42℃±1℃培养24h～48h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。

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观察24h培养与48h培养的琼脂平板上的菌落形态，mCCDA琼脂平板上的可疑菌落通常为淡灰色，

有金属光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长的倾向。Skirrow血琼脂平板上的第一型可疑菌落为灰色、扁平、

湿润有光泽，呈沿接种线向外扩散的倾向；第二型可疑菌落常呈分散凸起的单个菌落，边缘整齐、发亮。

空肠弯曲菌显色培养基上的可疑菌落按照说明进行判定。

5.4鉴定

5.4.1弯曲菌属的鉴定

概述

挑取5个（如少于5个则全部挑取）或更多的可疑菌落接种到哥伦比亚血琼脂平板上，微需氧条件

下42℃±1℃培养24h～48h，按照～进行鉴定，结果符合表1的可疑菌落确定为弯曲菌

属。