GB 4789.16-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 常见产毒霉菌的形态学鉴定

中华人民共和国国家标准

—

GB4789.162016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

常见产毒霉菌的形态学鉴定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

/w42020228/w42020228/w42020228

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GB4789.162016

前言

本标准代替/—《食品卫生微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定》

GBT4789.162003

/—,:

本标准与GBT4789.162003相比主要修改如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品微生物学检验常见产毒霉菌的形态学鉴定

———增加了检验程序;

———、、、;

增加了黑曲霉炭黑曲霉棒曲霉红曲霉等产毒菌种

———修改了标准名称;

———修改了设备和材料;

———修改了培养基和试剂;

———修改了各菌种形态描述;

———修改了附录A;

———、、、、;

删除了黄绿青霉岛青霉皱褶青霉产紫青霉红青霉等菌种

、、。

———删除检索表原附录B附录C附录D

Ⅰ

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GB4789.162016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

常见产毒霉菌的形态学鉴定

1范围

本标准规定了食品中常见产毒真菌的鉴定方法。

()、()、()

本标准适用于曲霉属Aserillus青霉属Penicillium镰刀菌属Fusarium及其他菌属中常

pg

见产毒真菌的鉴定。

2设备和材料

,:

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

冰箱:。

2.12℃~5℃

恒温培养箱:。

2.225℃±1℃

:。

显微镜倍倍

2.310~100

2.4目镜测微尺。

2.5物镜测微尺。

2.6生物安全柜。

2.7恒温水浴箱。

2.8接种钩。

2.9分离针。

2.10载玻片。

2.11盖玻片。

2.12不锈钢小刀或眼科手术小刀。

3试剂和培养基

:。

3.1乳酸苯酚液见A.1

:。

3.2查氏培养基见A.2

:。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基见

3.3-A.3

:。

3.4麦芽汁琼脂培养基见A.4

:。

3.5无糖马铃薯琼脂培养基见A.5

4操作步骤

:,。、

4.1菌落特征观察为了培养完整的菌落以供观察记录可将纯培养物点种于平板上曲霉青霉通常

,,。

接种查氏培养基镰刀菌通常需要同时接种多种培养基其他真菌一般使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基

-

,,,

将平板倒转向上接种一点或三点每个菌株接种两个平板正置于25℃±1℃恒温培养箱中进行培

1

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GB4789.162016

。,,

养当刚长出小菌落时取出一个平皿以无菌操作用灭菌不锈钢小刀或眼科手术小刀将菌落连同培养

,,,。,

基切下1cm×2cm的小块置菌落一侧继续培养于5d~14d进行观察此法代替小培养法可观

察子实体着生状态。

:(、)(),,

4.2斜面观察将真菌纯培养物划线接种曲霉青霉或点种镰刀菌或其菌于斜面培养5d~14d

,。

观察菌落形态同时还可以直接将试管斜面置低倍显微镜下观察孢子的形态和排列

:,,,

制片取载玻片加乳酸苯酚液一滴用接种钩取一小块真菌培养物置乳酸苯酚液中用两支分离

4.3-

,,。,,

针将培养物轻轻撕成小块切忌涂抹以免破坏真菌结构然后加盖玻片如有气泡可在酒精灯上加热

。。

排除制片时应在生物安全柜或无菌接种罩或接种箱或手套箱内操作以防孢子飞扬

:、、,。

4.4镜检观察真菌菌丝和孢子的形态特征孢子的排列等并记录

5检验程序

常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序见图1。

图1常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序

6各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素

曲霉属()

6.1Aserillus

pg

、、、、、、

本属的产毒真菌主要包括黄曲霉寄生曲霉杂色曲霉构巢曲霉赭曲霉黑曲霉炭黑曲霉和棒曲

。、、、。

霉等这些真菌可能产生黄曲霉毒素赭曲霉毒素伏马菌素展青霉素等次生代谢产物

,;

曲霉属的菌丝体无色透明或呈明亮的颜色但不呈暗污色可育的分生孢梗茎以大体垂直的方向从

,,;,,

特化的厚壁的足细胞生出光滑或粗糙通常无横隔顶端膨大形成顶囊具不同形状从其表面形成瓶

,,,。,

梗或先产生梗基再从梗基上形成瓶梗最后由瓶梗产生分生孢子分生孢子单胞具不同形状和各种

,,。,

颜色光滑或具纹饰连接成不分枝的链由顶囊到分生孢子链构成不同形状的分生孢子头显现不同

。,;;

颜色有的种可形成厚壁的壳细胞形状因种而异有的种则可形成菌核或类菌核结构还有的种产生

,,,、。

有性阶段形成闭囊壳内含子囊和子囊孢子子囊孢子大多透明或具不同颜色形状和纹饰

6.1.1黄曲霉(lavus)

A.f

菌落在查氏琼脂上生长迅速,直径(),达

25℃7d35mm~40mm~70mm12d~14d55mm~

2

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GB4789.162016

;,,;

70mm质地主要为致密丝绒状有时稍现絮状或中央部分呈絮状平坦或现辐射状至不规则的沟纹分

,,,,(

生孢子结构多颜色为黄绿至草绿色初期较淡老后稍深大多近于浅水芹绿色LihtCressGreen→

g

,),(,),(’,

CressGreenR.XXXI也有呈木犀绿色MinonetteGreenR.XXXI暗草绿色KronbersGreen

gg

)(,),,(,

R.XXXI或翡翠绿色JadeGreenR.XXXI者有的菌株初期现黄色近于锶黄StrontiumYellowR.

),;;,,,,

XVI而后变绿一般无渗出液有的菌株形成少量或大量菌核大量时影响菌落外观伴随有渗出液

,,,。

无色至淡褐色菌落反面无色至淡褐色产生菌核的菌株在形成菌核处的反面显现黑褐色斑点分生

,,()(),,

孢子头初为球形后呈辐射形80~200~500~800m或裂成几个疏松的柱状体也有少数呈短柱

μ

;,()()()(),

状者分生孢子梗大多生自基质孢梗茎200~400~800~3000m×4~9.6~16~20m壁

μμ

,,;,()(),,

厚无色粗糙至很粗糙顶囊近球形至烧瓶形直径9~23~50~65m大部表面可育小者仅上部

μ

;:(),,

可育产孢结构双层梗基6.2~13.219~×3.2m×6m瓶梗6.2~12m×2.4~4m有的小顶

μμμμ

;()(),

囊只生瓶梗分生孢子多为球形或近球形2.4~3.6~4.8~6.4m少数呈椭圆形3.2~5.2m×

μμ

,;,,,,

2.7~4.2m壁稍粗糙至具小刺有的菌株产生菌核初为白色老后呈褐黑色球形或近球形大小或

μ

,(),。

数量各异一般为280~420~980m见图2

μ

黄曲霉的某些菌株可产生黄曲霉毒素()。

Aflatoxins

图2黄曲霉的产孢结构和分生孢子

寄生曲霉()

6.1.2A.arasiticus

p

,;,

菌落在查氏琼脂上25℃7d直径35mm12d~14d50mm~60mm质地丝绒状偶有絮状菌

,;,,(,),

丝边缘白色分生孢子结构多颜色为深绿色近于雪松绿CedarGreenR.VI老后变暗近于常春藤

(,);,,,(,

绿IvGreenR.XXXI有辐射状沟纹无渗出液菌落反面呈淡褐色近于浅灰褐色LihtDrabR.

yg

)。,,;,

VLVI分生孢子头初为球形后呈辐射形直径84m~210m分生孢子梗生自基质孢梗茎140~

μμ

(),,;,()

420~800m×6~12m壁现粗糙也有近于光滑者顶囊为杵形或烧瓶形直径13.8~17~

μμ

,;,,

31m大部表面可育产孢结构单层瓶梗6.2~10.6m×2.4~4m偶尔可观察到较长者可达

μμμ

,;,()(),,;

15m中间具一隔壁分生孢子球形或近球形3.6~4.2~5.5~6.4m壁稍粗糙具粗硫小刺未

μμ

,。

见菌核见图3

寄生曲霉的菌株都能产生黄曲霉毒素。

3

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GB4789.162016

图3寄生曲霉的产孢结构和分生孢子

杂色曲霉()

6.1.3A.versicolor

,,;

菌落在查氏琼脂上生长局限直径达质地

25℃7d15mm~17mm10d~12d24mm~30mm

,;,,,

为丝绒状或絮状或两种质地并存或相互镶嵌菌落不平稍厚中央部分隆起或凹陷或呈不同程度的

;,,,、(,

翘曲颜色差异很大初为白色后呈不同程度的绿色近于青豆绿阿福花绿PoisGreenAshodel

p

,)(,),(,

GreenR.XLI至深葡萄绿DeeGraeGreenR.XLI有的菌株呈孔雀绿MalachiteGreenR.XXX

pp

),(,)(,),,

Ⅱ橄榄绿OliveGreenR.Ⅳ或暗橄榄褐色DarkOliveBuffR.XL间或有不呈绿色者取决于分

;、,(,)

生孢子结构的多少菌丝体呈黄褐色粉红色近于浅褐粉红色BuffPinkR.XXLⅢ或淡粉红肉桂色

y

(,),;;;

PalePinkishCinnamrnR.XXIX因不同菌株而异分生孢子结构有时形成迟缓有辐射状沟纹渗

,,;;

出液有或无近于无色或呈淡褐色至紫红色形成小滴或聚成大滴无明显气味或稍具霉味菌落反面颜

,、、,;,

色不一近于无色至淡黄褐色粉红色玫瑰紫色或紫褐色色素扩散于基质有的菌株形成壳细胞老培

。,,,();

养物中可见聚成淡黄色的团块分生孢子头较小初为球形后呈辐射形直径25~75~125m分

μ

()(),,

生孢梗茎直接生自基质者45~150~300~500m×4~8m生自气生菌丝者大都很短无色或稍

μμ

,,;、,,/,

带黄色壁较厚光滑顶囊半球形稍长形或稍呈椭圆形直径约的表面可育小顶囊仅

9~20m34

μ

;:,

分生孢梗茎顶部稍加膨大而不明显产孢结构双层梗基一般5~8m×2~3m瓶梗6~8m×1.5

μμμ

;,,()(),,;

~2.5m分生孢子球形或近球形绿色直径2~2.5~3.5~4m壁粗糙具小刺壳细胞球形或近

μμ

,,,。

球形直径11m~20m大量形成时聚成淡黄色的团块见图4

μμ

杂色曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素()。

sterimatocstin

gy

4

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GB4789.162016

说明:

,———产孢结构;

14

2———不完整的产孢结构;

,———分生孢子;

35

6———壳细胞。

、

图4杂色曲霉的产孢结构分生孢子和壳细胞

构巢裸胞壳()

6.1.4Emericellanidulans

:()

无性型构巢曲霉A.nidulans

,;,

菌落在查氏琼脂上25℃7d直径25mm左右12d~14d45mm~65mm质地丝绒状或絮状平

;,,(

坦或具不明显的放射沟纹分生孢子结构大量或较少呈不同程度的绿色近于翡翠绿至水芹绿Jade

,)或林肯绿至阿福花绿(,)乃至

Green→CressGreenR.XXXILincolnGreen→AshodelGreenR.XLI

p

(,);,,

浅黄橄榄色LihtYellowishOliveR.XXX有部分闭囊壳散在其间有的菌株产生大量的闭囊壳由

g

,,,、

壳细胞所包围使表面显现黄色团块或絮状颗粒结构使菌落带黄褐色近于鹿褐色浅黄褐色或古铜色

(,,;,);、,;

FawnColorBuffBrownR.XLIsabellaColorR.XXX渗出液多少或无呈淡红褐至紫褐色无

y

;,(,),。

气味菌落反面淡紫褐色至紫褐色近于葡萄酒鹿褐色VinaceousFawnR.XL稍扩散于基质闭囊

,,(),;,

壳球形暗紫红色直径100~250~300m外面由壳细胞所包围而呈现淡黄色子囊近球形8~

μ

,,;,,

12m一般在二周内成熟有的则不成熟子囊孢子双凸镜形3.5~5m×3.2~4m具两个完整的

μμμ

,,,,。,,

赤道冠具褶宽约0.5~1m紫红色凸面光滑分生孢子头初为球形至放射形直径30~70m老

μμ

,;,,()

后呈致密短柱形50~100m×30~40m分生孢子梗生自基质或气生菌丝孢梗茎大多较短20~

μμ

(),,,;,,

50~150~300m×3.5~6.5m稍弯曲带茶褐色壁光滑顶囊为半球形颜色与孢梗茎相同直径

μμ

(),;:,

5.5~8~16m上半部表面可育产孢结构双层梗基4~8m×2.5~3m有的异常菌株在顶囊上

μμμ

,;()(),,

形成肥大的近于球形的梗基瓶梗5~8m×2~2.5m分生孢子球形2.5~3~4~4.5μm粗糙

μμ

;,,,

偶而近于光滑壳细胞大多为球形直径11m~25m少数稍长或椭圆形18~40m×12~24m

μμμμ

见图5。

构巢曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素。

5

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GB4789.162016

说明:

———产孢结构;

1

2———分生孢子;

3———子囊孢子;

4———壳细胞。

图构巢裸胞壳的产孢结构

5

赭曲霉()

6.1.5A.ochraceus

,;

菌落在查氏琼脂上直径达质地丝绒状或

25℃7d25mm~35mm10d~12d35mm~55mm

,;,,

稍现絮状平坦或具不明显的辐射状沟纹分生孢子结构稠密或较稀疏淡黄褐色近于鹿皮色至肉桂色

(,,)或黄赭色(,),也有近于古铜色

ChamoisR.XXX→CinnamonR.XXIXYellowOcherR.XV

(,),;;;,

IsabellaR.XXX者菌丝体白色有时形成无色至褐色的渗出液稍具霉味有的菌株能形成菌核单

;。,

独或成群菌落反面无色或呈不同程度的绿褐色至紫褐色分生孢子头初为球形75m~200m老

μμ

,;,

后可达500m常裂开成几个分叉的致密柱状体分生孢梗大多生自基质孢梗茎一般500~

μ

(),,,,;

1500m×6~10~15m少数长者可达200m以上多呈褐色壁厚0.7~1.5m粗糙顶囊球形

μμμμ

,()(),,,;:

或近球形20~30~45~55m全部表面可育偶有小顶囊存在仅顶部可育产孢结构双层梗基

μ

()(),;,

7~10~25m×2.5~3~6m瓶梗7~13m×1.5~3m分生孢子多为球形或近球形直径

μμμμ

()(),,,。

2~2.5~3.5~4m少数宽椭圆形3~3.5m×2.5~3m壁近于光滑或细密粗糙若有菌核则

μμμ

,,,,,。

为球形卵形或稍长500m~1000m初为白色后呈紫褐色见图6

μμ

赭曲霉的某些菌株可产生赭曲霉毒素()。

Ochratoxins

6

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GB4789.162016

图赭曲霉的产孢结构和分生孢子

6

黑曲霉()

6.1.6A.nier

g

,,;

菌落在查氏琼脂上生长迅速25℃7d直径一般50mm~70mm少数菌株较局限平坦或中心稍

,;,;

凸起有规则或不规则的辐射状沟纹质地丝绒状或稍呈絮状有的菌株偶有不育性过度生长分生孢子

,;,;;,

结构大量表面呈暗褐黑色至炭黑色渗出液有或无无色具或不具霉味有的菌株产生菌核在斜面培

;、。

养时多生于基部菌落反面无色或呈不同程度的黄色黄褐色或带微黄绿色分生孢子头初为球形至辐

,,,;,

射形直径150~500m老后分裂成几个圆柱状结构可达800m分生孢子梗发生于基质孢梗茎

μμ

()(),,;,

8001500~3500~4000m×9~20m壁光滑老时带黄色或黄褐色顶囊球形或近球形直径

μμ

()(),,;:

30~40~70~80m老时褐色全部表面可育产孢结构双层梗基在一定时间范围内随菌龄的增

μ

,()()()(),;()()

大而增大10~15~35~70m×3~5~8~14m老时暗褐色瓶梗7~8~10~12m×

μμμ

(),,,(),

2~2.5~3m分生孢子球形近球形或老后横向变扁直径3~4.8~5.4m壁明显粗糙或具尖

μμ

、,;,

疣不规则的脊状突起或纵向条纹偶有稍现粗糙或近于平滑者如有菌核则为球形或近球形直径

,,,。

700m~1000m或更大奶油色至淡黄色见图7

μμ

黑曲霉的某些菌株可产生族伏马菌素()。

BFumonisinsB

7

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图7黑曲霉的产孢结构和分生孢子

6.1.7炭黑曲霉(