GB 4789.34-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌的鉴定

中华人民共和国国家标准

GB4789.34—2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定

2012-05-17发布2012-07-17实施

中华人民共和国卫生部发布

GB4789.34—2012

前言

本标准代替GB/T4789.34-2008《食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验》。

本标准与GB/T4789.34-2008相比，主要变化如下：

——修改了标准的中文名称；

——修改了培养基和试剂；

——删除了果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶（F6PPK）测定和双歧杆菌的计数方法。

I

GB4789.34—2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定

1范围

本标准规定了食品中双歧杆菌（Bifidobacterium）的鉴定方法。

本标准适用于食品中双歧杆菌的鉴定。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a）恒温培养箱：36℃±1℃；

b）气相色谱仪配FID检测器；

c）冰箱：2℃～5℃；

d）天平：感量0.1g；

e）无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm；

f）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器（200μL～1000μL）

及配套吸头；

g）无菌锥形瓶：500mL、250mL。

3培养基和试剂

3.1双歧杆菌培养基：见附录A中的A.1。

3.2PYG液体培养基：见附录A中的A.2。

3.3甲醇：分析纯。

3.4三氯甲烷：分析纯。

3.5硫酸：分析纯（体积比）。

3.6冰乙酸：分析纯（体积比）。

3.7乳酸：分析纯。

3.8乙酸标准溶液：吸取分析纯冰乙酸5.7mL，移入100mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附

录B，此溶液浓度约为1mol/L。

3.9乙酸标准使用液：将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至0.01mol/L。

3.10乳酸标准溶液：吸取分析纯乳酸8.4mL，移入100mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附

录B，此溶液浓度约为1mol/L。

3.11乳酸标准使用液：将经标定的乳酸标准溶液用水稀释至0.01mol/L。

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GB4789.34—2012

4鉴定程序

双歧杆菌鉴定程序见图1。

样品25g（mL）+225mL灭菌生理盐水

10倍系列稀释

选择2个～3个适当稀释度，各取0.1mL

分别加入到双歧杆菌琼脂平板进行涂布

厌氧，48h

36℃±1℃

挑取菌落接种于双歧杆菌琼脂平板

厌氧，48h

36℃±1℃

革兰氏染色，过氧化氢酶试验

接种PYG液体培养基生化反应

厌氧，48h

36℃±1℃

测定乙酸、乳酸

报告

图1双歧杆菌鉴定程序

5操作步骤

5.1样品制备

5.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

5.1.2以无菌操作称取25g（mL）样品，置于装有225mL生理盐水的灭菌锥形瓶内，制成1:10的样品匀

液。

5.2稀释及涂布培养步骤

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GB4789.34—2012

5.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1.0mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的

无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制

成1:100的样品匀液。

5.2.2另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按5.2.1操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一

次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。

5.2.3根据待鉴定菌种的活菌数，选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL稀释液，用L棒

在双歧杆菌琼脂平板进行表面涂布,每个稀释度作两个平皿。置36℃±1℃温箱内培养48h±2h，培养后

选取单个菌落进行纯培养。

5.3纯培养

挑取3个或以上的菌落接种于双歧杆菌琼脂平板，厌氧，36℃±1℃培养48h。

5.4镜检及生化鉴定

5.4.1涂片镜检

双歧杆菌菌体为革兰氏染色阳性，不抗酸、无芽孢，无动力，菌体形态多样，呈短杆状、纤细杆状或

球形，可形成各种分支或分叉形态。

5.4.2生化鉴定

过氧化氢酶试验为阴性。选取纯培养平板上的三个单个菌落，分别进行生化反应检测，不同双歧杆菌

菌种主要生化反应见附录B。

5.5有机酸代谢产物测定

气相色谱法测定双歧杆菌的有机酸代谢产物,见附录C。

6报告

根据镜检及生化鉴定的结果（5.4）、双歧杆菌的有机酸代谢产物乙酸与乳酸微摩尔之比大于1（5.5），

报告双歧杆菌属的种名。

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GB4789.34—2012

附录A

培养基

A.1双歧杆菌琼脂培养基

A.1.1成分

蛋白胨15.0g

酵母浸膏2.0g

葡萄糖20.0g

可溶性淀粉0.5g

氯化钠5.0g

西红柿浸出液400.0mL