GB 4789.8-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

中华人民共和国国家标准

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GB4789.82016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

2016-08-31发布2016-09-20实施

中华人民共和国

发布

国家卫生和计划生育委员会

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GB4789.82016

前言

本标准代替/—《食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。

GBT4789.82008

/—,:

本标准与GBT4789.82008相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

———修改了典型菌落的形态描述;

———删除了生化鉴定中的商品化名称;

———描述了血清鉴定的方法。

Ⅰ

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GB4789.82016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

1范围

本标准规定了食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌()的检验方法。

Yersiniaenterocolitica

本标准适用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。

2设备和材料

,:

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

2.1冰箱:0℃~4℃。

恒温培养箱:、。

2.226℃±1℃36℃±1℃

显微镜:倍倍。

2.310~100

2.4均质器。

:。

2.5天平感量0.1g

灭菌试管:、。

2.616mm×160mm15mm×100mm

:()、()。

灭菌吸管具刻度具刻度

2.71mL0.01mL10mL0.1mL

锥形瓶:、。

2.8200mL500mL

:。

2.9灭菌平皿直径90mm

2.10微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。

3培养基和试剂

:。

3.1改良磷酸盐缓冲液见A.1

():。

培养基见

3.2CIN-1CeulodinIrasanNovobiocinAarA.2

pgg

(,):。

改良培养基见

3.3YAarYModifiedA.3

g

:。

3.4改良克氏双糖培养基见A.4

:。

3.5糖发酵管见A.5

:。

3.6鸟氨酸脱羧酶试验培养基见A.6

:。

3.7半固体琼脂见A.7

[()]:。

缓冲葡萄糖蛋白胨水甲基红和试验用见

3.8MRV-PA.8

:。

3.9碱处理液见A.9

:。

3.10尿素培养基见A.10

:。

3.11营养琼脂见A.11

3.12小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清。

1

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GB4789.82016

4检验程序

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序见图1。

图小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序

1

5操作步骤

5.1增菌

()

以无菌操作取25g或25mL样品放入含有225mL改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均

,/。,。

质袋内以8000rmin均质1min或拍击式均质器均质1min液体样品或粉末状样品应振荡混匀

均质后于26℃±1℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。

5.2碱处理

,。

除乳与乳制品外其他食品的增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL充分混合15s

2

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GB4789.82016

5.3分离

将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别接种于琼脂平板和改良琼脂

CIN-1Y

,。,(

平板26℃±1℃培养48h±2h典型菌落在CIN-1上为深红色中心周围具有无色透明圈红色牛

),,、。

眼状菌落菌落大小为在改良琼脂平板上为无色透明不黏稠的菌落

1mm~2mmY

5.4改良克氏双糖试验

,,,

分别挑取中的可疑菌落个个分别接种于改良克氏双糖铁琼脂接种时先在斜面划线再

5.33~5

,,。

于底层穿刺26℃±1℃培养24h将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定

5.5尿素酶试验和动力观察

,,,,

用接种环挑取一满环5.4得到的可疑培养物接种到尿素培养基中接种量应足够大振摇几秒钟

。,

26℃±1℃培养2h~4h将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中于26℃±1℃和

。,

36℃±1℃培养24h将在26℃有动力而36℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板进行

,。

纯化培养用纯化物进行革兰氏染色镜检和生化试验

5.6革兰氏染色镜检

。,,

将纯化的可疑菌进行革兰染色小肠结肠炎耶尔森氏菌呈革兰氏阴性球杆菌有时呈椭圆或杆状

大小为()

0.8m~3.0m×0.8m

μμμ

5.7生化鉴定