GB 4789.39-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 粪大肠菌群计数

中华人民共和国国家标准

GB4789.39—2013

食品安全国家标准

食品微生物学检验粪大肠菌群计数

20131129发布20140601实施

GB4789.39—2013

前言

本标准代替GB/T4789.39-2008《食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数》

本标准与GB/T4789.39-2008相比，主要修改如下：

——修改了标准的中文名称；

——修改了操作步骤；

——增加了附录B

I

GB4789.39—2013

食品安全国家标准

食品微生物学检验粪大肠菌群计数

1范围

本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法

本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数

2术语和定义

2.1粪大肠菌群

一群在44.5℃培养24h～48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌

群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性

3技术要求设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：36℃±1℃;

b)冰箱：2℃～5℃;

c)恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃;

d)天平：感量0.1g;

e)均质器;

f)振荡器;

g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头;

h)无菌锥形瓶：容量500mL;

i)无菌培养皿：直径90mm;

j)pH计或pH比色管或精密pH试纸

4培养基及试剂

4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1

4.2EC肉汤（E.coliBroth）：见附录A中A.2

4.3无菌生理盐水：见附录A中A.3

4.41mol/LNaOH：见附录A中A.4

4.51mol/LHCl：见附录A中A.5

5检验程序

粪大肠菌群检验程序见图1

1

GB4789.39—2013

检样

25g(mL)样品+225mL稀释液，均质

10倍系列稀释

月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤

36148h2h

℃±℃±

不产气产气

EC肉汤

44.50.224h2h

℃±℃±

不产气产气

粪大肠菌群阴性管粪大肠菌群阳性管

查MPN表

报告结果

图1粪大肠菌群MPN计数法检验程序

6操作步骤

6.1样品的稀释

6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000

r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液，或置225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打

式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液

6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶

内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液

6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节

6.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入盛有9mL磷酸盐缓冲

液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌

吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液

6.1.5根据对样品污染状况的估计，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液每递增稀释1次，换用1支1

mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min

6.2初发酵试验

2

GB4789.39—2013

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月

桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1

℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2

h记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验

如采用多个稀释度，最终确定最适的三个连续稀释度方法参见附录B

6.3复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于预先升温至44.5℃的EC肉汤管中。将所有

接种的EC肉汤管放入带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，培养24h±2h，水浴箱的水面应高于肉汤培养基

液面，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性