GB 4789.5-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验

中华人民共和国国家标准

GB

GB

GGBB4789.5—2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验志贺氏菌检验

2012-05-17发布2012-07-17实施

中华人民共和国卫生部发布

GB4789.5-2012

前言

本标准代替GB/T4789.5-2003《食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验》。

本标准与GB/T4789.5-2003相比，主要变化如下：

——修改了标准名称；

——修改了培养基和试剂；

——修改了操作步骤中增菌部分和生化试验及附加生化试验部分；

——修改了表2；

——修改了表4。

I

GB4789.5-2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验志贺氏菌检验

1范围

本标准规定了食品中志贺氏菌(Shigella)的检验方法。

本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a）恒温培养箱：36℃±1℃；

b）冰箱：2℃～5℃；

c）膜过滤系统；

d）厌氧培养装置：41.5℃±1℃；

e）电子天平：感量0.1g；

f）显微镜：10×～100×；

g）均质器；

h）振荡器；

i）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

j）无菌均质杯或无菌均质袋：容量500mL；

k）无菌培养皿：直径90mm；

l）pH计或pH比色管或精密pH试纸；

m）全自动微生物生化鉴定系统。

3培养基和试剂

3.1志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录A中A.1。

3.2麦康凯（MAC）琼脂：见附录A中A.2。

3.3木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录A中A.3。

3.4志贺氏菌显色培养基。

3.5三糖铁（TSI）琼脂：见附录A中A.4。

3.6营养琼脂斜面：见附录A中A.5。

3.7半固体琼脂：见附录A中A.6。

3.8葡萄糖铵培养基：见附录A中A.7。

3.9尿素琼脂：见附录A中A.8。

2

GB4789.5-2012

3.10β-半乳糖苷酶培养基：见附录A中A.9。

3.11氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.10。

3.12糖发酵管：见附录A中A.11。

3.13西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中A.12。

3.14粘液酸盐培养基：见附录A中A.13。

3.15蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中A.14。

3.16志贺氏菌属诊断血清。

3.17生化鉴定试剂盒。

4检验程序

志贺氏菌检验程序见图1。

3

GB4789.5-2012

检样

25g（或25mL）样品+志贺氏菌增菌肉汤225mL

41.5±

℃１℃，

16h20h

～厌氧培养

XLDMAC或志贺氏菌显色培养基

36℃±１℃20h48h

，～

挑取可疑菌落

TSI，半固体，

营养琼脂斜面

血清学分型生化鉴定

志贺氏菌属分群及分型结果

报告

图1志贺氏菌检验程序

5操作步骤

5.1增菌

以无菌操作取检样25g（mL），加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均

质器以8000r/min～10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质

器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。于41.5℃±１℃，厌氧培养16h～20h。

5.2分离

取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板

±

上，于36℃1℃培养20h～24h，观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大

于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在

不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。

4

GB4789.5-2012

表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

选择性琼脂平板志贺氏菌的菌落特征

MAC琼脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐

XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐

志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定

5.3初步生化试验

5.3.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一

管，置36℃±1℃培养20h～24h，分别观察结果。

5.3.2凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏

菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其5.3.1中已培养的营养琼脂斜面

上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。

5.4生化试验及附加生化试验

5.4.1生化试验

用5.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧

酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳

性;宋内氏菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的β-半乳糖苷酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏

菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，

必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶

阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定

为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。

表2志贺氏菌属四个群的生化特征

生化反应A群：痢疾志贺氏菌B群：福氏志贺氏菌C群：鲍氏志贺氏菌D群：宋内氏志贺氏菌

ß-半乳糖苷酶－a－－a＋

尿素－－－－

赖氨酸脱羧酶－－－－

鸟氨酸脱羧酶－－－b＋

水杨苷－－－－

七叶苷－－－－

/()/

靛基质－＋＋－＋－

甘露醇－＋c＋＋

棉子糖－＋－＋

甘油(＋)－(＋)d

+--/++/-+d

注：表示阳性；表示阴性；表示多数阴性；表示多数阳性；（）表示迟缓阳性；表示有不同生化型。

a113

痢疾志贺型和鲍氏型为阳性。

b13

鲍氏型为鸟氨酸阳性。

c46

福氏型和型常见甘露醇阴性变种。

5.4.2附加生化实验

由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes碱性-异型）

菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺

氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36℃培养24h～48h)。志

贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。

5

GB4789.5-2012

表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别

A群：痢疾B群：福氏C群：鲍氏D群：宋内氏

生化反应大肠埃希氏菌A-D菌

志贺氏菌志贺氏菌志贺氏菌志贺氏菌

葡萄糖铵－－－－＋＋

西蒙氏柠檬酸盐－－－－dd

粘液酸盐－－－d＋d

+-d

注1：表示阳性；表示阴性；表示有不同生化型。

A-D

注2：在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、（碱

性异型）菌至少有一项反应为阳性。-

5.4.3如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可根据5.3.2的初步判断结果，用5.3.1中已培

养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。

5.5血清学鉴定

5.5.1抗原的准备

志贺氏菌属没有动力，所以没有鞭毛抗原。志贺氏菌属主要有菌体（O）抗原。菌体O抗原又可分为

型和群的特异性抗原。

一般采用1.2%～1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。

K1mL100

注1：一些志贺氏菌如果因为抗原的存在而不出现凝集反应时，可挑取菌苔于生理盐水做成浓菌液，℃煮

15min60minK

沸～去除抗原