GB 4789.36-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验

中华人民共和国国家标准

—

GB4789.362016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

大肠埃希氏菌:/检验

O157H7NM

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

—

GB4789.362016

前言

本标准代替/—《食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌:/检验》。

GBT4789.362008O157H7NM

/—,:

本标准与GBT4789.362008相比主要变化如下

———“:/”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157H7NM检验

———修改了标准的范围;

———修改了设备和材料;

———修改了培养基和生化反应的文字描述;

———“”;

删除第二法免疫磁珠捕获法的原理

———“”;

删除第三法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法

———“”。

删除第四法全自动病原菌检测系统筛选法

Ⅰ

—

GB4789.362016

食品安全国家标准

食品微生物学检验

大肠埃希氏菌:/检验

O157H7NM

1范围

本标准规定了食品中大肠埃希氏菌:/(:/)的检验方法。

O157H7NMEscherichiacoliO157H7NM

本标准适用于食品中大肠埃希氏菌:/的检验。

O157H7NM

2设备和材料

,:

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

恒温培养箱:。

2.136℃±1℃

冰箱:。

2.22℃~5℃

恒温水浴箱:。

2.346℃±1℃

:、。

2.4天平感量0.10.01

gg

2.5均质器。

:。

显微镜倍倍

2.610~100

:()、()。

无菌吸管具刻度具刻度或移液器及吸头

2.71mL0.01mL10mL0.1mL

:。

2.8无菌均质杯或无菌均质袋容量500mL

:。

2.9无菌培养皿直径90mm

2.10H计或精密H试纸。

pp

:,。

2.11长波紫外光灯365nm功率≤6W

微量离心管:或。

2.121.5mL2.0mL

、、。

2.13磁板磁板架样品混合器

2.14微生物鉴定系统。

3培养基和试剂

():。

改良肉汤见

3.1ECmEC+nA.1

():。

3.2改良山梨醇麦康凯琼脂CT-SMAC见A.2

():。

三糖铁琼脂见

3.3TSIA.3

:。

3.4营养琼脂见A.4

:。

3.5半固体琼脂见A.5

():。

3.6月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUGMUG-LST见A.6

:。

3.7氧化酶试剂见A.7

:。

3.8革兰氏染色液见A.8

:。

3.9PBS-Tween20洗液见A.9

亚碲酸钾(级)。

3.10AR

1

—

GB4789.362016

头孢克肟()。

3.11Cefixime

3.12大肠埃希氏菌O157显色培养基。

大肠埃希氏菌和诊断血清或乳胶凝集试剂。

3.13O157H7O157

3.14鉴定试剂盒。

抗免疫磁珠。

3.15-E.coliO157

第一法常规培养法

4检验程序

大肠埃希氏菌:/常规培养法检验程序见图。

O157H7NM1

图大肠埃希氏菌:/常规培养法检验程序

1O157H7NM

5操作步骤

5.1增菌

(),

以无菌操作取检样25g或25mL加入到含有225mLmEC+n肉汤的均质袋中在拍击式均质

器上连续均质;或放入盛有肉汤的均质杯中,/

1min~2min225mLmEC+n8000rmin~

/均质。培养。

10000rmin1min~2min36℃±1℃18h~24h

2

—

GB4789.362016

5.2分离

,,

取增菌后的mEC+n肉汤划线接种于CT-SMAC平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上

,。,、、

36℃±1℃培养18h~24h观察菌落形态在CT-SMAC平板上典型菌落为圆形光滑较小的无色

,;

菌落中心呈现较暗的灰褐色在大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上的菌落特征按产品说明书进行

判定。

5.3初步生化试验

,

在和大肠埃希氏菌显色琼脂平板上分别挑取个个可疑菌落分别接种

CT-SMACO1575~10

,,()

TSI琼脂同时接种MUG-LST肉汤并用大肠埃希氏菌株ATCC25922或等效标准菌株做阳性对照

:(),

和大肠埃希氏菌O157H7NCTC12900或等效标准菌株做阴性对照于36℃±1℃培养18h~

。。,,

24h必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色在TSI琼脂中典型菌株为斜面与底层均呈黄色产气或

,()。,

不产气不产生硫化氢HS置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察MUG阳性的大肠埃希氏菌

2

,,:/,

株应有荧光产生阴性的应无荧光产生大肠埃希氏菌为试验阴性无荧

MUGO157H7NMMUG

。,,,。

光挑取可疑菌落在营养琼脂平板上分纯于36℃±1℃培养18h~24h并进行下列鉴定

5.4鉴定

5.4.1血清学试验

,

在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落用和诊断血清或乳胶凝集试剂作玻片凝集试

O157H7O157

。,,,,

验对于因子血清不凝集者应穿刺接种半固体琼脂检查动力经连续传代次动力试验均阴

H73

,。,。

性确定为无动力株如使用不同公司生产的诊断血清或乳胶凝集试剂应按照产品说明书进行

5.4.2生化试验

,。:/

5.4.2.1自营养琼脂平板上挑取菌落进行生化试验大肠埃希氏菌O157H7NM生化反应特征见

表1。

表大肠埃希氏菌:/生化反应特征

1O157H7NM

生化试验特征反应

三糖铁琼脂