GB 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数

GB4789.3-2016

食品微生物学检验大肠菌群计数

定义

•在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧

和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

•直接或间接来自人与温血动物的肠道；包括肠杆

菌科的大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属

和克雷伯菌属，其中大肠埃希菌属为典型大肠埃

希氏菌。

大肠菌群的卫生学意义

•人与温血动物粪便污染的指示菌：

•大肠埃希氏菌——粪便近期污染；

•其他菌属——粪便陈旧污染。

•肠道致病菌污染食品的指示菌：

•与肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）来源相同；

在外界生存的时间与主要肠道致病菌一致。

修订的主要内容

•本标准与GB4789.2-2010相比，主要修改如下：

•删除了标准的英文名称；

•修改了发布单位名称：

•2010版本“中华人民共和国卫生部”

•2016版本“中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会”和“国家食品药品监督

管理总局”

•前言：

•本标准代替GB4789.3-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》

GB/T4789.32-2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169-

2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数

部分。

•增加了检验原理;

•修改了适用范围;

•修改了典型菌落的形态描述;

•修改了第二法平板菌落数的选择;

•修改了第二法证实试验;

•修改了第二法平板计数的报告。

大肠菌群计数

•第一法MPN法

•适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;

•第二法平板计数法

•适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

术语和定义

•大肠菌群Coliforms

•在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼

性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

•最可能数MostProbableNumber(MPN）

•基于泊松分布的一种间接计数方法。

检验原理

•MPN法

•MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待

测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释

度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测

样品中大肠菌群的最大可能数。

•平板计数法

•大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作

用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的

菌落。

大肠菌群计数第一法MPN法

检样

25g(mL)样品+225mL稀释液，均质

10倍系列稀释

选择适宜三个连续稀释度的样品匀液，接种LST

36℃±1℃24h-48h

不产气产气

BGLB肉汤

36℃±1℃48h±2h

不产气产气

大肠菌群阴性管大肠菌群阳性管

查MPN表

结果报告

LST初发酵

BGLB验证

报告

第一步培养基

初发酵培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤

A.1.1成分

胰蛋白胨或胰酪胨20.0g提供氮源

氯化钠5.0g调节渗透压

乳糖5.0g提供碳源、指示系统

磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g调节pH

磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g调节pH

月桂基硫酸钠0.1g抑制革兰氏阳性菌生长

蒸馏水1000mL

pH6.8±0.2

A.1.2制法

将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。

121℃高压灭菌15min。

大肠菌群计数MPN法-LST肉汤发酵

Img_1039.jpg

•第二步培养基：煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤

•成分

作用

•蛋白胨10.0g

提供氮源

•乳糖10.0g

提供碳源并作为指示剂

•牛胆粉（oxgall