GB 4789.31-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验

中华人民共和国国家标准

GB4789.31—2013

食品安全国家标准

食品微生物学检验

沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌

的肠杆菌科噬菌体诊断检验

2013-11-29发布2014-06-01实施

GB4789.31—2013

前言

本标准代替GB/T4789.31-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌

的肠杆菌科噬菌体检验方法》。

本标准与GB/T4789.31-2003相比,主要变化如下：

——修改了操作步骤；

——增加了附录B。

I

GB4789.31—2013

食品安全国家标准

食品微生物学检验

沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的

肠杆菌科噬菌体诊断检验

1范围

本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断方法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌。

本标准适用于各类食品和食源性疾病事件样品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的检验。

本标准适用于食品行业从业人员肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌、培养的设备外，其他设备和材料如下：

a)恒温培养箱：36℃±1℃,42℃±1℃，50℃±1℃;

b)厌氧培养装置：41.5℃±0.5℃;

c)显微镜：10倍～100倍;

d)水平仪：噬菌体试验的工作台面应调整至水平位置;

e)已灭菌1mL一次性注射器（应为塑料材质），针头无编号，使用前测定每滴5L~10L（每

mL有100~200滴）可用;

f)微量移液器及吸头（10L和5L）;

g)定量移液器及吸头（100L和50L）;

h)无菌吸管：10mL、5mL、1mL;

i)无菌毛细管;

j)无菌培养皿：90mm;

k)无菌棉签;

l)带盖的灭菌小试管：8mm×50mm;

m)载物玻片。

3培养基和试剂

3.1亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A中的A.1。

3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A中的A.2。

3.3志贺氏菌（BCT）增菌液：见附录A中的A.3。

3.4营养肉汤（NB）：见附录A中的A.4。

3.5营养琼脂（NA）：见附录A中的A.5。

3.6营养半固体琼脂（NSA）：见附录A中的A.6。

1

GB4789.31—2013

3.7三糖铁琼脂（TSI）：见附录A中的A.7。

3.8葡萄糖铵琼脂：见附录A中的A.8。

3.9肠杆菌科诊断用噬菌体，7种和3种。必要时可再购置大肠埃希氏菌分型噬菌体（6种）一套。安

瓿开启后用无菌毛细管吸出移入灭菌小试管内，如果每次使用量很少，可分装于2~3支试管内，保存于

5℃冰箱备用。

3.10沙门氏菌因子血清，志贺氏菌分型因子血清，致泻大肠埃希氏菌分型因子血清。因子血清的种类

视需要而定。

4检验程序

4.1沙门氏菌的检验程序

沙门氏菌的检验程序见图1。

2

GB4789.31—2013

检样

前增菌、增菌和分离

挑取可疑菌落

噬菌体试验TSI(斜面、底面、产气、HS)

2

蛋白胨水（靛基质）

尿素（pH7.2）,KCN,赖氨酸

O-1裂解非如左述的各种噬菌体

其他均不裂解各种裂解结果均不裂解

HS+,靛基质－，HS+，靛基质+，HS－，靛基质－，非如左述的

222

尿素－，KCN－，尿素－，KCN－，尿素－，KCN－，各种反应结果

赖氨酸＋赖氨酸+赖氨酸+/－

甘露醇、山梨醇ONPG

＋,＋,－－,－+

沙门氏菌非沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌非沙门氏菌非沙门氏菌

血清学试验证实血清学试验证实血清学试验证实

报告

图1沙门氏菌的检验程序

4.2志贺氏菌的检验程序

志贺氏菌的检验程序见图2。

3

GB4789.31—2013

检样

增菌和分离

挑取可疑菌落

TSI，葡萄糖半固体

TSI底层产酸,斜面产碱，HS－非如左述的各

2

不产气，无动力种反应结果

噬菌体试验

Sh裂解，并呈现Sh不裂解

各种裂解模式

血清学试验与裂解模式相符血清学试验与裂模式不相符

且被1RTDSh裂解或不被1RTDSh裂解

葡萄糖铵试验

生化分群试验必要时加做乙酸钠、克氏柠檬酸盐、

黏液酸、七叶苷、水杨苷试验

七叶苷\水杨苷试验

志贺氏菌属葡萄糖铵+非志贺氏菌非志贺氏菌

分群及分型结果或任何其他阳性结果

非志贺氏菌

报告

图2志贺氏菌的检验程序

4

GB4789.31—2013

4.3致泻大肠埃希氏菌的检验程序

致泻大肠埃希氏菌的检验程序见图3。

检样

增菌和分离

乳糖发酵或不发酵

的菌落3~5个

噬菌体试验

E和或Sh、E－4E和或Sh、E－4各种噬菌体均不裂解

噬菌体不裂解噬菌体裂解氧化酶－，G－杆菌

其他噬菌体裂解

不同来源分离的菌株TSI，靛基质，

其裂解模式具有同一性pH7.2尿素，KCN,

赖氨酸，动力

TSI底层＋，HS－,非如左述

2

KCN－，尿素－各种反应结果

血清学试验

ETEC+STEC(O157)EPEC+EIEC+非如左述

各种反应结果

肠毒素+赖氨酸－，靛基质+，

stx1,stx2,hly+eae+

动力－(O124动力+/－)

非大肠产肠毒素产志贺毒素肠道致病性肠道侵袭性非致泻大非大肠

埃希氏菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌肠埃希氏菌埃希氏菌

报告

图3致泻大肠埃希氏菌的检验程序

5

GB4789.31—2013

5操作步骤

5.1前增菌、增菌和分离

5.1.1沙门氏菌的前增菌、增菌和分离按GB4789.4进行。沙门氏菌增菌液灵敏度的测定见附录B。在

食品行业从业人员的肠道沙门氏菌带菌检验时，采集的标本应增菌，不应前增菌。食物中毒标本不应前

增菌，所采集的标本同时做增菌和不增菌步骤。

5.1.2志贺氏菌的增菌和分离按GB4789.5进行。没有厌氧培养条件的实验室可以采用附录A中的BCT

增菌液。食物中毒患者的粪便标本同时做增菌和不增菌步骤。

5.1.3致泻大肠埃希氏菌的增菌和分离按GB4789.6和GB4789.36进行。食物中毒标本同时做增菌和

不增菌步骤。

5.2噬菌体试验

5.2.1培养基的准备

营养琼脂平板（含琼脂1%~1.5%，为防止变形杆菌的蔓延生长，可按0.02%量加入十二烷基硫酸钠），

营养琼脂加热溶化后，加入每个9cm平皿中约20mL~25mL，放在水平台面上待其凝固。翻转平板，

在36℃1℃培养箱内半开皿倒置约1h，或50℃1℃培养箱内半开皿倒置约30min，以烘干培养基

表面水分。

5.2.2试验菌液的准备

5.2.2.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，检验沙门氏菌时，挑取乳糖阴性产

HS或不产HS的菌落，和乳糖阳性产HS的菌落。检验大肠埃希氏菌时挑取乳糖阳性或乳糖阴性的菌

222

落。检验志贺氏菌时挑取典型或可疑菌落分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36