GB 4789.13-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验

中华人民共和国国家标准

GB4789.13—2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验

2012-05-17发布2012-07-17实施

中华人民共和国卫生部发布

GB4789.13—2012

前言

本标准代替GB/T4789.13—2003《食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验》。

本标准与GB/T4789.13—2003相比，主要变化如下：

——修改了标准的中文名称；

——修改了样品制备过程；

——修改了培养基与试剂；

——修改了操作步骤；

——修改了菌数计算部分；

——增加了附录A。

I

GB4789.13—2012

食品安全国家标准

食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验

1范围

本标准规定了食品中产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens）的检验方法。

本标准适用于食品中产气荚膜梭菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a）恒温培养箱：36℃±1℃；

b）冰箱：2℃～5℃；

c）恒温水浴箱：50℃±1℃，46℃±0.5℃；

d）天平：感量0.1g；

e）均质器；

f）显微镜：10×～100×；

g）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

h）无菌试管：18mm×180mm；

i）无菌培养皿：直径90mm；

j）pH计或pH比色管或精密pH试纸；

k）厌氧培养装置。

3培养基和试剂

3.1胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂：见附录A中A.1。

3.2液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）：见附录A中A.2。

3.3缓冲动力-硝酸盐培养基：见附录A中A.3。

3.4乳糖-明胶培养基：见附录A中A.4。

3.5含铁牛乳培养基：见附录A中A.5。

3.60.1%蛋白胨水：见附录A中A.6。

3.7革兰氏染色液：见附录A中A.7。

3.8硝酸盐还原试剂：见附录A中A.8。

3.9缓冲甘油-氯化钠溶液：见附录A中A.9。

4检验程序

1

GB4789.13—2012

产气荚膜梭菌检验程序见图1。

检样

25g(mL)检样+225mL0.1%蛋白胨水

均质、稀释

-1-6

10～10稀释液各1mL+TSC琼脂混合

厌氧培养，36℃±1℃、20h～24h，黑色菌落计数

任选黑色菌落5个，分别接种FTG培养基

确证试验

镜检形态牛奶发酵动力-硝酸盐乳糖-明胶

报告

图1产气荚膜梭菌检验程序

5操作步骤

5.1样品制备

5.1.1样品采集后应尽快检验，若不能及时检验，可在2℃～5℃保存；如8h内不能进行检验，应以

无菌操作称取25g（mL）样品加入等量缓冲甘油-氯化钠溶液（液体样品应加双料），并尽快至于-60℃

低温冰箱中冷冻保存或加干冰保存。

5.1.2以无菌操作称取25g（mL）样品放入含有225mL0.1%蛋白胨水（如为5.1.1中冷冻保存样品，

室温解冻后，加入200mL0.1%蛋白胨水）的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min～2min；或

置于盛有225mL0.1%蛋白胨水的均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，作为1:10稀释

液。

-2-6

5.1.3以上述1:10稀释液按1mL加0.1%蛋白胨水9mL制备10～10的系列稀释液。

2

GB4789.13—2012

5.2培养

5.2.1吸取各稀释液1mL加入无菌平皿内，每个稀释度做两个平行。每个平皿倾注冷却至50℃的TSC

琼脂（可放置于50℃±1℃恒温水浴箱中保温）15mL，缓慢旋转平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。

5.2.2上述琼脂平板凝固后，再加10mL冷却至50℃的TSC琼脂（可放置于50℃±1℃恒温水浴箱

中保温）均匀覆盖平板表层。

5.2.3待琼脂凝固后，正置于厌氧培养装置内，36℃±1℃培养20h～24h。

5.2.4典型的产气荚膜梭菌在TSC琼脂平板上为黑色菌落。

5.3确证试验

5.3.1从单个平板上任选5个（小于5个全选）黑色菌落，分别接种到FTG培养基，36℃±1℃培养

18h～24h。

5.3.2用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检并观察其纯度。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗短的杆菌，有

时可见芽孢体。如果培养液不纯，应划线接种TSC琼脂平板进行分纯，36℃±1℃厌氧培养20h～24h，

挑